Titulação de coronavírus humanos Usando um ensaio de imunoperoxidase
Summary
Neste vídeo, demonstramos um método alternativo para a detecção e titulação de vírus usando uma técnica de detecção de antígeno enzimático conhecido como um ensaio de imunoperoxidase. Aqui, vamos mostrar-lhe como coletar as amostras virais, preparar as células para testes, e, finalmente, o ensaio de imunoperoxidase utilizando diluições de série para determinar o título viral.
Abstract
Cálculo de doenças infecciosas virais títulos representa uma abordagem básica e essencial experimental para virologistas. Ensaios de placa clássico não pode ser usado para vírus que não causam efeitos significativos citopático, o que é o caso de cepas 229E e OC43 de coronavírus humano (HCoV). Um ensaio de imunoperoxidase indireta alternativa (IPA) é aqui descrita para a detecção e titulação desses vírus. Células susceptíveis são inoculadas com diluições de série logarítmica de amostras em uma placa de 96 poços. Após o crescimento viral, a detecção viral por IPA produz o título de vírus infecciosos, expresso como "Cultura de Tecidos Dose Infecciosa" (TCID50). Isto representa a diluição de uma amostra de vírus contendo em que metade de uma série de poços de laboratório contêm vírus replicantes. Esta técnica é um método confiável para a titulação de HCoV em amostras biológicas (células, tecidos ou fluidos).
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
