Titrering av mänskliga coronavirus Använda en immunofluorescensteknik analys

Summary

I denna video visar vi en alternativ metod för att upptäcka och titering av virus med hjälp av en enzymatisk metod för påvisande av antigen som kallas en immunofluorescensteknik analys. Här kommer vi att visa dig hur du hämta din virala prover, förbereda celler för att testa, och slutligen immunofluorescensteknik analysen med seriella spädningar för att bestämma virus titer.

Abstract

Beräkning av smittsam virussjukdom titrar är en grundläggande och viktiga experimentell metod för virologer. Klassisk plack analyser kan inte användas för virus som inte orsakar betydande cytopatisk effekter, vilket är fallet för stammar 229E och OC43 av mänskliga coronavirus (HCoV). Ett alternativ indirekt immunofluorescensteknik analys (IPA), vilka beskrivs nedan för upptäckt och titrering av dessa virus. Mottagliga celler inokuleras med seriell logaritmisk spädningar av prover i ett 96-brunnar. Efter viral tillväxt, ger virus upptäckt av IPA den smittsamma virus titer, uttryckt som "vävnadsodling infektionsdos" (TCID50). Detta representerar utspädning av ett virus som innehåller prov vid vilken hälften av en serie av laboratorie-brunnar innehåller replikera virus. Denna teknik är en tillförlitlig metod för titrering av HCoV i biologiska prover (celler, vävnader eller vätskor).

Protocol

Den fullständiga texten protokollet för denna experimentella strategi finns i Springer protokoll .