补丁钳爪蟾卵母细胞中表达的离子通道
Summary
这是为了介绍，从非洲爪蟾卵母细胞来修补钳记录。它涵盖了卵黄膜去除，形成一个gigaohm密封（gigaseal），和可选的补丁外拓扑的转换。
Abstract
由于其发展索克曼和内尔1，2，膜片钳已成为一个极为有用的方法，为单个或多个细胞离子通道的电生理测量。这种技术可以应用到离子通道，在其原生环境，并在异源细胞，如从非洲爪蛙，非洲爪蟾收获的卵母细胞，表达的。在这里，我们描述了补丁钳爪蟾卵母细胞的行之有效的技术。这项技术是用来衡量人口（macropatch）或单独（单声道录音）的表达离子通道的特性。我们专注于技术，以最大限度地提高卵母细胞的制备和密封代质量。随着各方面的因素进行了优化，这种技术提供了一个成功的印章代概率在90％以上。基于他或她认为最重要的因素的每一个研究员，这个过程可能是不同的优化，我们目前的方法，导致在我们手中最大的成功。
Protocol
第1部分：删除卵黄膜准备两套镊子。我们更喜欢5号钳，其中一组已略微削尖文件。修整和抛光火7“巴斯德吸管，还要准备一个玻璃移液管。 建议：为了防止打滑的卵母细胞，切圈电网（1毫米广场）和胶成一个60毫米培养皿的底部。此菜可重复使用，无限期如果使用之间保持清洁。 高渗溶液（配方），在解剖显微镜下填写的培养皿一半。 取出1-3爪蟾卵母细胞，…
Discussion
有许多的电生理记录参数，这里不讨论。钻机安装，系统噪声管理，渠道表达，和记录协议都良好的实验结果也很关键。
根据我们的经验，这些都是形成密封可靠，最关键的参数：高品质的卵母细胞，迅速取出卵黄膜（又名“剥皮”），使用新拉的移液器防尘，流畅的移液器，积极施加压力，在入浴时解决方案，在洗澡的简短的时间之前密封。话虽如此，经验差别很大，别人有自己的一组最重要的因素。
Acknowledgements
从RW Aldrich公司的实验室解决方案处方萎缩。我们感谢以下资助机构的支持和基础：美国国立卫生研究院，唐纳德B.肌肉萎缩症协会，美国国家科学基金会，美国心脏协会，和迪莉娅E.巴克斯特基金会，Klingenstein基金和神经科学的麦克奈特基金会。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Patch Clamp Amplifier & Software | Instrument | HEKA or Axon | EPC-10 | Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B) |
| No. 5 forceps (two pairs) | Tool | Fine Science Tools | ||
| Oocyte shrinking solution | Reagent | Ingredient In mM N-methyl-D-glucamine 220 HEPES 10 MgCl2 1 EGTA 10 Aspartic Acid 220 KCl 2 pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine | ||
| woven mesh | 800 um | Spectrum Laboratories INC | 146481 |
References
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
- Sackmann, B., Neher, E. . Single-channel Recording. , (1983).
Cite This Article
L Brown, A., E. Johnson, B., B. Goodman, M. Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes. J. Vis. Exp. (20), e936, doi:10.3791/936 (2008).