Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음
Summary
이것은 Xenopus laevis oocytes에서 클램프의 녹음 패치에 대한 소개로서 것입니다. 그것은 vitelline 막 제거, gigaohm 인감 (gigaseal)의 형성, 그리고 외부 아웃 토폴로지에 패치의 선택 변환을 다룹니다.
Abstract
Sakmann 및 Neher 1, 2에 의해 개발 이후, 패치 클램프 세포에서 하나 또는 여러 개의 이온 채널의 electrophysiological 측정을위한 매우 유용한 기술로 설립되었다. 이 기술들은 기본 환경 모두에서 이온 채널에 적용 및 아프리카 발톱 개구리, Xenopus laevis oocytes에서 수확으로 heterologous 세포에 표현할 수있다. 여기, 우리는 Xenopus의 oocytes에서 패치 클램프 녹음의 잘 설립 기법을 설명합니다. 이 기술은 개별적으로 인구 (macropatch) 또는 (단일 채널 녹음)에 어느 표현 이온 채널의 속성을 측정하는 데 사용됩니다. 우리는 oocyte 준비 및 인감 세대의 품질을 극대화하기 위해 기술에 중점을두고 있습니다. 모든 요소가 최적으로,이 기법은 90 % 이상 성공 인감 세대의 가능성을 제공합니다. 과정은 그 또는 그녀가 가장 중요한 발견 요인에 따라 모든 연구자가 다르게 최적화, 우리는 우리 손에 가장 큰 성공으로 이어질있는 방법을 제시 수도 있습니다.
Protocol
Discussion
여기에 논의하지 electrophysiological 녹음 많은 매개 변수가 있습니다. 릭 설치, 시스템 소음 관리, 채널 표현 및 기록 프로토콜은 모든 좋은 실험 결과 또한 중요합니다.
우리의 경험에서, 이들은 안정적인 물개를 형성을위한 가장 중요한 파라미터 : 목욕을 입력하면 고품질 oocytes는 (일명, "필링") 빠르게 vitelline 막 제거, 먼지로부터 보호 새로 가져온 pipettes 부드러운 pipettes, 적용 긍정적인 압력을 사용?…
Acknowledgements
축소 솔루션 제조법은 RW 알드리치의 연구실에서입니다. 보건 국립 연구소, 국립 과학 재단 (National Science Foundation), 미국 심장 협회, 근육질 영양 장애 협회, 도널드 B.와 델리아 E. 백스터 재단 Klingenstein 기금과 신경 과학에 대한 맥나이트 엔다우먼트 : 우리는 지원을위한 다음과 같은 자금 지원 기관 및 재단 감사드립니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Patch Clamp Amplifier & Software | Instrument | HEKA or Axon | EPC-10 | Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B) |
| No. 5 forceps (two pairs) | Tool | Fine Science Tools | ||
| Oocyte shrinking solution | Reagent | Ingredient In mM N-methyl-D-glucamine 220 HEPES 10 MgCl2 1 EGTA 10 Aspartic Acid 220 KCl 2 pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine | ||
| woven mesh | 800 um | Spectrum Laboratories INC | 146481 |
References
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260, 799-802 (1976).
- Sackmann, B., Neher, E. . Single-channel Recording. , (1983).
