चूहा सुपीरियर सरवाइकल ganglia (एससीजी) से सहानुभूति न्यूरॉन्स संवर्धन के लिए प्रोटोकॉल
Summary
यह प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे अलग करने के लिए और संस्कृति नवजात चूहे पिल्ले की बेहतर ग्रीवा ganglia (एससीजी) से प्राथमिक सहानुभूति न्यूरॉन्स है.
Abstract
चूहों में बेहतर ग्रीवा ganglia (एससीजी) छोटे, चमकदार, बादाम के आकार का संरचनाओं कि सहानुभूति न्यूरॉन्स होते हैं. इन न्यूरॉन्स सिर और गर्दन के क्षेत्रों के लिए सहानुभूति innervations प्रदान करते हैं और वे एक अच्छी तरह से विशेषता और अपेक्षाकृत सजातीय जनसंख्या (4) का गठन. सहानुभूति न्यूरॉन्स के अस्तित्व भेदभाव, और axonal विकास और प्रसार व्यापक NGF की उपलब्धता को अपनी संस्कृति और प्रयोगात्मक हेरफेर (2, 3, 6) की सुविधा के लिए तंत्रिका वृद्धि कारक (NGF) पर निर्भर हैं. इन कारणों के लिए, सुसंस्कृत सहानुभूति न्यूरॉन्स अध्ययन की एक विस्तृत विविधता में neuronal विकास और भेदभाव, और क्रमादेशित रोग कोशिका मृत्यु के तंत्र, और संकेत पारगमन (1, 2, 5, और 6) सहित इस्तेमाल किया गया है. नवजात चूहों और संवर्धन सहानुभूति न्यूरॉन्स से बाहर विदारक एससीजी बहुत जटिल नहीं है और काफी जल्दी में महारत हासिल किया जा सकता है है. इस अनुच्छेद में, हम विस्तार से वर्णन कैसे बाहर काटना नवजात चूहे पिल्ले से एससीजी और उन्हें उपयोग करने के लिए सहानुभूति न्यूरॉन्स की संस्कृतियों की स्थापना करेंगे. लेख भी तैयारी कदम और विभिन्न अभिकर्मकों और उपकरण है कि इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए की जरूरत है वर्णन करेंगे.
Protocol
Discussion
हम हमारे संस्कृतियों के लिए Sprague Dawley चूहों का उपयोग करें.
समय और ध्यान रखना जब ganglia सफाई. सभी मलबे, रक्त वाहिकाओं और वसा निकालें. यह कदम एक संस्कृति है कि अधिक या कम सजातीय और बाहरी सेल प्रकार के मुक्त है सुनिश्चित …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
NZ उसे सहानुभूति न्यूरॉन्स विदारक और कटाई में प्रशिक्षण के लिए प्रयोगशाला के सदस्यों सुभाष बिस्वास, एंड्रयू Sproul, और रयान Willet धन्यवाद देना चाहूंगा. NIH-NINDS से अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps, Stainless steel #5 | Tool | Roboz | RS4976 | |
| Scissors, DEAVER straight sharp-blunt- 43mm blades – 5.5 | Tool | Roboz | RS6760 | |
| RPMI 1640 w/ L-Glutamin | Reagent | Cellgro, Mediatech, Inc. | 10-040-CV | |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | SAFC Biosciences | 12103c | |
| Donor Horse Serum | Reagent | JRH Biosciences | 12449 | Heat-inactivate by incubating in 56°C waterbath for 30 minutes. |
| Penicillin/streptomycin | Reagent | Gibco, Invitrogen | 15140-122 | |
| Trypsin without EDTA | Reagent | Difco | MT 25-050-CI | |
| Uridine | Reagent | Sigma | U3003 | |
| 5-Fluoro-5′ deoxyuridine | Reagent | Sigma | F-8791 | |
| NGF | Reagent | Harlan Bioproduct | BT-5025 | |
| Dissection Microscope and light source | Microscope | |||
| 15 ml polypropylene tubes | Tool | BD Falcon | 352096 | |
| Cell culture dishes | Tool | Corning, Nunclone |
References
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