ड्रोसोफिला हार्ट की तैयारी: वयस्क मक्खी में हार्ट फिजियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए एक तकनीक

- कशेरुकी की तुलना में अलग, ड्रोसोफिला दिल एक खुली संचार प्रणाली का हिस्सा है। वयस्क फ्लाई का दिल कार्डियोमायोसाइट्स से निर्मित एक ट्यूब जैसी संरचना है जो एलरी मांसपेशियों द्वारा एपिडर्मिस से जुड़ा हुआ है और एक्स्ट्रासेलर मैट्रिक्स में एम्बेडेड है। दिल का कक्ष फ्लाई के पीछे के छोर पर है और पंपों के पीछे के छोर पर है जिससे यह खुले शरीर में बहता है।

कीड़ों में, हीमोलिम्फ रक्त और मध्यवर्ती तरल पदार्थ दोनों के रूप में कार्य करता है, पोषक तत्वों को ले जाता है, अणुओं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं को संकेत देता है। हृदय के अतिरिक्त स्थलों में ओस्टिया शामिल है, जो ट्यूब के साथ उद्घाटन करते हैं, और इंट्राकार्डिएक वाल्व। पेरिकार्डियल कोशिकाओं को हृदय नली के साथ स्थानीयकृत किया जाता है और फ्लाई के उत्सर्जन प्रणाली का हिस्सा हैं।

एक प्रयोगात्मक हृदय की तैयारी में, कृत्रिम हीमोलिम्फ ऊतक समारोह को संरक्षित करने के लिए शारीरिक स्थितियों की नकल करता है। हालांकि प्राकृतिक हीमोलिम्फ गैस एक्सचेंज के लिए जिम्मेदार नहीं है, कृत्रिम हेमोलिम्फ को कार्यात्मक श्वास नली प्रणाली की कमी के विकल्प के लिए अच्छी तरह से ऑक्सीजनित किया जाना चाहिए। निम्नलिखित प्रयोग में, हम लाइव इमेजिंग या इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए वयस्क फ्लाई से अर्ध-बरकरार दिल की तैयारी प्रदर्शित करते हैं।

- शुरू होने से पहले, हम सबसे पहले एक कृत्रिम हीमोलिम्फ समाधान तैयार करते हैं। इस समाधान में सुक्रोज और ट्रेहलोस होते हैं, जिसे बैक्टीरियल संदूषण को रोकने के लिए उपयोग करने से ठीक पहले रेफ्रिजरेटेड स्टॉक समाधानों से कृत्रिम हेमोलिम्फ में जोड़ा जाना चाहिए। कृत्रिम हीमोलिम्फ को कमरे के तापमान में लाएं और कम से कम 15 मिनट तक हवा में बुदबुदाते हुए समाधान को ऑक्सीजनित करें।

इसके बाद, एक मानक पिपेट पुलर का उपयोग करके कई ठीक केशिकाओं को खींचें, जो मक्खी में वसा निकायों को हटाने के लिए आवश्यक होंगे।

एक बार सब कुछ तैयार हो जाने के बाद, वयस्क मक्खियों को एनेस्थेटाइज्ड किया जाना चाहिए। यह दो से पांच मिनट तक झपकी लेने के लिए संक्षिप्त जोखिम का उपयोग करके किया जा सकता है, लेकिन सावधान रहें कि मक्खियों को पांच मिनट से अधिक समय तक फ्लाई नैप में न छोड़ें। ठंड के अल्पकालिक संपर्क का उपयोग मक्खियों को एनेस्थेटाइज करने के लिए भी किया जा सकता है, लेकिन कार्बन डाइऑक्साइड की सिफारिश नहीं की जाती है क्योंकि यह हृदय गति और लयबद्धता पर लंबे समय तक चलने वाले प्रभावों का होता है।

इसके बाद, एनेस्थेटाइज्ड मक्खियों को रखा जाता है, पृष्ठीय पक्ष नीचे, पेट्रोलियम जेली की एक पतली परत के साथ लेपित पेट्री डिश में। पंखों और शरीर में हाइड्रोफोबिक क्यूटिकल को जेली से चिपकना चाहिए, लेकिन जरूरत पड़ने पर फ्लाई को फिर से स्थापित किया जा सकता है। एक प्रारंभिक कटौती वसंत कैंची की घुमावदार जोड़ी का उपयोग करके की जाती है। यह कैंची ब्लेड को फ्लाई के पैरों के नीचे रखकर किया जाता है और गर्दन के पास छाती की सतह की ओर नीचे कोण किया जाता है।

सिर, वेंट्रल नर्व कॉर्ड और पैरों को एक ही कट के साथ हटा दिया जाता है। एक बार कट जाने के बाद तैयारी को ऑक्सीजनयुक्त कृत्रिम हीमोलिम्फ समाधान में जलमग्न कर दिया जाता है। स्प्रिंग कैंची का उपयोग करके पेट के पीछे की नोक, जिसमें पेट खंड 7 और 8 शामिल होते हैं, एक ही कट के साथ हटा दिया जाता है । यह पेट के दोनों किनारों के साथ पार्श्व कटौती करने के लिए उपयोग प्रदान करता है और पीछे की आंत और पेट के काटने के बीच कनेक्शन तोड़ने का काम करता है ।

कैंची के ब्लेड को पेट की नोक में छोटे से खोलने में डालें और बाद में क्यूटिकल काट लें। यह वेंट्रल क्यूटिकल के एक किनारे को मुक्त करता है। फ्लैप को संदंश के साथ पकड़ें और पेट के विपरीत पार्श्व किनारे के साथ इसी तरह का कट बनाएं। वेंट्रल पेट क्यूटिकल का मुक्त फ्लैप अब हटाया जा सकता है।

आंत और पेट के अन्य अंगों को आमतौर पर जौहरी संदंश और कोमल टगिंग का उपयोग करके एक द्रव्यमान के रूप में हटाया जा सकता है। आंतरिक अंगों को हटाने से धड़कने वाली दिल की नली का पता चलता है, जो अभी भी छोटी alary मांसपेशियों द्वारा पृष्ठीय क्यूटिकल से जुड़ी हुई है और वसा शरीर से घिरा हुआ है । खींचा केशिकाओं को प्लास्टिक में डाला जाता है, एक वैक्यूम स्रोत से जुड़ी 1/16 इंच ट्यूबिंग । सक्शन बल टिप व्यास के आनुपातिक है, इसलिए व्यास में ४० माइक्रोन से बड़े सुझावों के साथ पिपेट का इस्तेमाल नहीं किया जाना चाहिए ।

एक बार स्थापित होने के बाद, इस सक्शन सिस्टम का उपयोग दिल की नली के चारों ओर से अतिरिक्त वसा को चूसने के लिए किया जाता है। इसका उपयोग क्यूटिकल और किसी भी मलबे के आसपास जमा होने वाले हवा के बुलबुले को हटाने के लिए भी किया जा सकता है। दिल को छूने से बचने के लिए अत्यधिक सावधानी बरती जानी चाहिए, और क्योंकि दिल का पीछे का हिस्सा बहुत नाजुक है, उस क्षेत्र को पूरी तरह से टाला जाना चाहिए । वयस्क ड्रोसोफिला दिल ट्यूब अब उजागर किया जाना चाहिए और धड़क रहा होना चाहिए ।

यदि आवश्यक हो, तो क्यूटिकल और संलग्न दिल को धीरे से पेट्रोलियम जेली से बाहर क्यूटिकल उठाने और सावधानी से इसे वापस नीचे टैम्पिंग करके फिर से स्थापित किया जा सकता है, फिर से दिल के ऊतकों के साथ किसी भी संपर्क से परहेज । इस बिंदु पर, तैयारी स्नान समाधान ताजा, कृत्रिम hemolymph के साथ प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए । इस तैयारी को किसी भी जोड़तोड़ से पहले ऑक्सीजन के साथ 20 से 30 मिनट के लिए संतुलन की अनुमति दी जानी चाहिए । यदि तैयारी ६० मिनट से अधिक समय के लिए बनाए रखा जाना है, यह ताजा कृत्रिम hemolymph के साथ फिर से perfused होना चाहिए । यह तैयारी अब ऑप्टिकल के लिए उपयोग किया जा सकता है रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और यह तैयारी अब ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के साथ इस्तेमाल किया जा करने के लिए तैयार है और रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल रिकॉर्डिंग के लिए या हिस्टोलॉजिकल जोड़तोड़ के लिए भी इस्तेमाल किया जा सकता है।