A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

Stefan Schmollinger; Daniela Strenkert; Vittoria Offeddu; Andr&#233; Nordhues; Frederik Sommer; Michael Schroda

doi:10.3791/4083

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Ein Protokoll für die Identifizierung von Protein-Protein-Wechselwirkungen Basierend auf 15 N Metabolische Markierung, Immunpräzipitation, Quantitative Massenspektrometrie und Affinity Modulation

JoVE Journal
Biology

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JoVE Journal Biology

A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on ¹⁵N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation

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Ein Protokoll für die Identifizierung von Protein-Protein-Wechselwirkungen Basierend auf 15 N Metabolische Markierung, Immunpräzipitation, Quantitative Massenspektrometrie und Affinity Modulation

DOI:

10.3791/4083-v

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14:44 min

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September 24, 2012

•

Stefan Schmollinger², Daniela Strenkert², Vittoria Offeddu², André Nordhues², Frederik Sommer², Michael Schroda²

¹Max Planck Institute of Molecular Plant Physiology, ²University of Kaiserslautern

Chapters

00:05Title
02:30Cell Lysis, Crosslinking and Sample Preparation
05:22Immunoprecipitation
07:06Sample Preparation for nano-LC-MS/MS
10:50Results: HSP70B with its Nucleotide Exchange Factor CGE1
14:07Conclusion

Summary

Automatic Translation

Wir präsentieren eine Variation der QUICK (quantitativen Immunpräzipitation mit Knockdown kombiniert) Ansatz, der zuvor wurde eingeführt, um zwischen wahr und falsch Protein-Protein-Wechselwirkungen zu unterscheiden. Unser Ansatz basiert auf 15N Metabolische Markierung, die Modulation der Affinitäten von Protein-Protein-Wechselwirkungen durch die Anwesenheit / Abwesenheit von ATP, Immunpräzipitation und quantitative Massenspektrometrie.

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