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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
The ELISA Method
  • 00:00Overview
  • 00:43ELISA: Components and Principles
  • 04:03Running an ELISA
  • 07:18Applications
  • 09:53Summary

Le test ELISA

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Overview

Un dosage d’immunoadsorption par enzyme lié ELISA (de enzyme-linked immunosorbent assay) est typiquement réalisé pour détecter la présence et/ou la quantité d’une protéine d’intérêt cible dans un échantillon expérimental. La détection de la protéine cible est rendue possible par les anticorps, qui font de l’ELISA un dosage immunologique. A travers une série d’étapes d’incubation et de lavages, ces anticorps, qui sont généralement liés, ou conjugués, à un enzyme, détecteront une protéine adsorbée au fond d’un puit de la microplaque. Lorsqu’il est exposé à un substrat, l’enzyme lié à l’anticorps provoque un changement de couleur, indiquant ainsi la présence de la protéiné d’intérêt dans l’échantillon.

Dans cette vidéo, la théorie derrière comment les ELISAs fonctionnent est expliquée, incluant une discussion sur les liaisons de l’anticorps primaire et secondaire et l’importance des étapes de blocage. La théorie est suivie par la pratique, comme la vidéo passe à l’explication de la procédure pas-à-pas. Finalement, des variations de l’ELISA standard telles que l’ELISA en sandwich et l’ELISA par compétition sont introduites, et les utilisations de cette méthode dans la vie de tous les jours , tel que le test de grossesse en vente libre, sont expliqués.

Procedure

L’ELISA, ou dosage d’immunoadsorption par enzyme lié (de enzyme-linked immunosorbent assay), est une méthode largement utilisée pour la détermination de la présence ou absence d’une protéine cible spécifique. Via une série d’étapes de lavages et d’attaches, un anticorps conjugué ou lié à un enzyme va reconnaitre une protéine cible au fond d’une plaque à 96 puits. Lorsque du substrat est ajouté à l’échantillon, une réaction enzymatique va avoir lieu, causant un changement de couleur qui permet l’id…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. The ELISA Method. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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