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높은 처리량 시퀀싱을 활용하여 전체 - 단백질 포화 돌연변이 유발 도서관의 기능 평가를위한 프로토콜
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Biology
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JoVE Journal Biology
A Protocol for Functional Assessment of Whole-Protein Saturation Mutagenesis Libraries Utilizing High-Throughput Sequencing
DOI:

11:36 min

July 03, 2016

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
  • 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
  • 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
  • 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
  • 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
  • 10:16Conclusion

Summary

Automatic Translation

우리는 높은 처리량 시퀀싱을 이용하여 단백질의 종합적인 단일 사이트 포화 돌연변이 라이브러리의 기능 평가를위한 프로토콜을 제시한다. 중요한 것은,이 방법은 라이브러리 구축 및 시퀀싱을 다중화하는 직교 프라이머 쌍을 사용한다. 암피실린의 임상 적 투여 량에서 선택 TEM-1 β-lactamase를를 사용하는 대표적인 결과가 제공된다.

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