A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 00:43Synthesis of NNS Sub-libraries for Each Amino Acid Position by Two-step PCR Site-directed Mutagenesis
- 01:53Cloning of NNS Sub-libraries into Selection Vectors
- 03:47Selection of the TEM-1 Whole-Protein Saturation Mutagenesis Library for Antibiotic Resistance
- 05:51High Throughput Sequencing to Determine Fitness Effects of Mutations
- 08:44Results: High Throughput Sequencing from Whole-Protein Saturation Mutagenesis
- 10:16Conclusion
Мы представляем протокол для функциональной оценки комплексных библиотек мутагенеза насыщения Одноузельная белков с использованием высокой пропускной последовательности. Важно отметить, что этот подход использует ортогональные пары праймеров мультиплекс библиотека строительства и последовательности. Представитель результаты с использованием TEM-1 бета-лактамазу, выбранный при клинически значимой дозы ампициллина предоставляются.
