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항온, 발현, 정제, 인간 세로토닌 전달체 결정화 바운드<em> S</em> 시탈 로프 람
JoVE Journal
Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram
DOI:

12:21 min

November 27, 2016

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
  • 02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
  • 04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
  • 05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
  • 07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
  • 08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
  • 10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
  • 11:25Conclusion

Summary

Automatic Translation

이 원고는 돌연변이를 thermostabilizing을 선별 인간의 세로토닌 수송을 정화, 높은 친 화성 항체를 생성하고, 항우울제 약물 S의 시탈 로프 람 바인딩 세로토닌 수송 - 항체 복합체를 결정화하는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 다른 도전 막 수송 수용체와 채널들의 연구에 적용 할 수있다.

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