Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Jonathan A. Coleman; Evan M. Green; Eric Gouaux

doi:10.3791/54792

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Termoestabilização, expressão, purificação e cristalização do transportador de serotonina humano Bound to S -citalopram

JoVE Journal
Biochemistry

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Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Termoestabilização, expressão, purificação e cristalização do transportador de serotonina humano Bound to S -citalopram

DOI:

10.3791/54792-v

•

12:21 min

•

November 27, 2016

•

Jonathan A. Coleman, Evan M. Green, Eric Gouaux³

¹Vollum Institute,Oregon Health & Science University, ²Graduate Group in Biophysics,University of California, San Francisco, ³Howard Hughes Medical Institute,Oregon Health & Science University

Chapters

00:05Title
00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
11:25Conclusion

Summary

Automatic Translation

Este manuscrito descreve como para o rastreio de mutações thermostabilizing, purificar o transportador humano de serotonina, gerar anticorpos de elevada afinidade, e cristalizar o complexo transportador-anticorpo serotonina ligada ao -citalopram S droga antidepressiva. Este protocolo pode ser adaptado para o estudo de outros transportadores difíceis de membrana, receptores e canais.

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