Il test TUNEL
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Overview
Uno dei tratti distintivi dell’apoptosi è la frammentazione del DNA nucleare da parte delle nucleasi. Questi enzimi sono attivati dalle caspasi, la famiglia di proteine che eseguono il programma di morte cellulare. Il test TUNEL è un metodo che sfrutta questa funzione per rilevare le cellule apoptotiche. In questo test, un enzima chiamato desossinucleotidil transferasi terminale catalizza l’aggiunta di nucleotidi dUTP alle estremità libere 3′ del DNA frammentato. Utilizzando dUTP etichettati con tag chimici in grado di produrre fluorescenza o colore, le cellule apoptotiche possono essere identificate in modo specifico.
Il video di JoVE sul test TUNEL inizia discutendo di come questa tecnica possa essere utilizzata per rilevare le cellule apoptotiche. Passiamo quindi attraverso un protocollo generale per eseguire saggi TUNEL su sezioni di tessuto e visualizzare i risultati utilizzando la microscopia a fluorescenza. Infine, saranno trattate diverse applicazioni del test alla ricerca attuale.
