A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Title
- 01:34Preparation of Streptavidin Coated Magnetic Beads — I
- 03:52Preparation of Cell Lysate
- 05:36Preparation of Streptavidin Magnetic Beads — II
- 06:34Pull-down of Target mRNA-miRNA Complexes
- 07:35Total RNA Extracted, cDNA Synthesis, and qPCR
- 08:57Results: Use of MicroRNAs to Capture the Target mRNA
- 09:55Conclusion
Este relatório descreve um método rápido e confiável para validar alvos de mRNA de miRNAs celulares. O método usa biotinilado sintético baseado no LNA de ácido nucleico trancado miRNA imita para capturar o alvo do mRNA. Posteriormente, grânulos magnéticos streptavidin-revestidas são empregados para pulldown o alvo mRNA para quantificação por qPCR reação em cadeia da polimerase.
