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非還元 SDS − PAGE 分析と化学的架橋を組み合わせて、培養中の哺乳動物細胞におけるジスルフィド結合によって安定化された多量体複合体を検出する
JoVE Journal
Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
Combining Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Chemical Crosslinking to Detect Multimeric Complexes Stabilized by Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture
DOI:

09:37 min

May 02, 2019

,

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:34Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide
  • 02:02Extraction of Protein and Sample Preparation
  • 03:13In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells
  • 04:30Fractionation of Nuclei
  • 06:11Extraction of Protein and Sample Preparation
  • 06:51SDS-PAGE Analysis
  • 07:53Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking
  • 09:04Conclusion

Summary

Automatic Translation

ジスルフィド結合は長い間多くのタンパク質の構造を安定化させることが知られている。これらのリンケージによって安定化された多量体複合体を分析する簡単な方法は、非還元 SDS − PAGE 分析を介して行う。ここで、この方法は、ヒト骨骨肉腫細胞株 dUTPase OS からの原発性の核アイソフォームを解析することにより図示される。

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