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In Vitro Analysis of E3 Ubiquitin Ligase Function

In vitro Análise da Função Ligase E3 Ubiquitin

DOI:
10.3791/62393-v

•

06:06 min

•

May 14, 2021

•

, , ,
1Institute for Genetics and Cologne Excellence Cluster on Cellular Stress Responses in Aging Associated Diseases (CECAD),University of Cologne, 2Center for Molecular Medicine Cologne,University of Cologne

Chapters

  • 00:05Introduction
  • 00:43In Vitro Auto-Ubiquitylation Assay
  • 01:31In vitro Substrate Ubiquitylation Assay
  • 02:13Lysine Discharge Assay
  • 03:37Results: Analysis of the Ubiquitylation Products
  • 05:28Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

O presente estudo fornece protocolos de ensaio de on-lona in vitro detalhados para a análise da atividade catalítica da ubiquitina E3. Proteínas recombinantes foram expressas usando sistemas procarióticos como a cultura Escherichia coli.

Tags

E3 Ubiquitin LigaseIn Vitro AnalysisE2 Enzyme SpecificitySubstrate SelectionUbiquitin TransferAuto-ubiquitylation AssaySubstrate Ubiquitylation AssayLysine Discharge AssayRecombinant ExpressionEukaryotic ProteinsSDS-PAGEThermal CyclerMaster MixEDTAApyrase

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