/
/
Snelle, enzymatische methoden voor versterking van minimale, lineaire sjablonen voor eiwitprototypering met behulp van celvrije systemen
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
De studie beschrijft een protocol voor het maken van grote (μg-mg) hoeveelheden DNA voor eiwitscreeningcampagnes uit synthetische genfragmenten zonder klonen of het gebruik van levende cellen. De minimale sjabloon wordt enzymatisch verteerd en gecicirkeld en vervolgens versterkt met behulp van isothermische rollende cirkelversterking. Celvrije expressiereacties konden worden uitgevoerd met het ongezuiverde product.
