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Chapters
- 00:04Introduction
- 00:59Assembly of the Microscopy Chamber
- 02:33Imaging Microtubule Bundles with 3‐Color TIRF
- 03:41Performing Optical Trap Experiments on Microtubule Bundles
- 06:02Results: Measuring Force Production by Kinesin‐5 and Frictional Force by PRC1
- 07:06Conclusion
Hier stellen wir ein Protokoll zur Rekonstitution von Mikrotubulibündeln in vitro und zur direkten Quantifizierung der in ihnen ausgeübten Kräfte durch simultanes optisches Einfangen und Totalreflexionsfluoreszenzmikroskopie vor. Dieser Assay ermöglicht die Messung der Kräfte und Verschiebungen, die von Proteinensembles in aktiven Mikrotubuli-Netzwerken erzeugt werden, auf Nanoskala-Ebene.
Tags
Microtubule BundlesCytoskeletal NetworksForce MeasurementOptical TrapTIRF MicroscopySingle-molecule ExperimentsProtein ConcentrationProtein DensityMitosisNeural DevelopmentMuscle ContractionCell MigrationStreptavidinNeutrAvidinCaseinBiotinylated MicrotubulesRhodamine MicrotubulesRigor Kinesin-coated BeadsReaction Buffer
