A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:59Assembly of the Microscopy Chamber
- 02:33Imaging Microtubule Bundles with 3‐Color TIRF
- 03:41Performing Optical Trap Experiments on Microtubule Bundles
- 06:02Results: Measuring Force Production by Kinesin‐5 and Frictional Force by PRC1
- 07:06Conclusion
Här presenterar vi ett protokoll för rekonstituering av mikrotubulibuntar in vitro och direkt kvantifiera de krafter som utövas inom dem med hjälp av samtidig optisk fångst och total intern reflektionsfluorescensmikroskopi. Denna analys möjliggör mätning på nanonivå av de krafter och förskjutningar som genereras av proteinensembler inom aktiva mikrotubulinätverk.
Tags
Microtubule BundlesCytoskeletal NetworksForce MeasurementOptical TrapTIRF MicroscopySingle-molecule ExperimentsProtein ConcentrationProtein DensityMitosisNeural DevelopmentMuscle ContractionCell MigrationStreptavidinNeutrAvidinCaseinBiotinylated MicrotubulesRhodamine MicrotubulesRigor Kinesin-coated BeadsReaction Buffer
