Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

جيل من القص التصاق خريطة طريق SynVivo شبكات الاوعية الدموية الدقيقة الاصطناعية

Published: May 25, 2014 doi: 10.3791/51025
Automatic Translation
1, 1, 1
1Biomedical Technology, CFD Research Corporation

Abstract

خلية / الجسيمات فحوصات التصاق حاسمة لفهم التفاعلات البيوكيميائية المشاركة في الفيزيولوجيا المرضية المرض ولها تطبيقات هامة في السعي لتطوير علاجات جديدة. فحوصات باستخدام الظروف ثابت تفشل في التقاط الاعتماد من الالتصاق على القص، مما يحد من ترابطها مع البيئة في الجسم الحي. بالتوازي غرف تدفق وحة أن تحديد التصاق تحت تدفق السوائل الفسيولوجية تحتاج تجارب متعددة لتوليد خريطة التصاق القص. بالإضافة إلى ذلك، فإنها لا تمثل في الجسم الحي على نطاق والتشكل وتتطلب كميات كبيرة (~ مل) من الكواشف للتجارب. في هذه الدراسة، ونحن لشرح جيل من القص خريطة التصاق من تجربة واحدة باستخدام شبكة الاوعية الدموية الدقيقة القائمة على جهاز ميكروفلويديك، SynVivo-SMN. هذا الجهاز بإعادة المعقدة في الجسم الحي الأوعية الدموية بما في ذلك نطاق وهندسية، والعناصر الشكلية، وميزات تدفق والتفاعلات الخلوية فيفي المختبر الشكل، وبالتالي توفير بيئة واقعية للبيولوجيا الأساسية والبحوث التطبيقية في السلوك الخلوية، وتسليم المخدرات، واكتشاف المخدرات. وقد أظهر الفحص من خلال دراسة تفاعل 2 ميكرون المغلفة البيوتين مع الأسطح المغلفة أفيدين من الرقائق الدقيقة. يتم الحصول على مجموعة كاملة من القص التي لوحظت في الأوعية الدموية الدقيقة في فحص تمكين التصاق واحد مقابل خريطة القص للجسيمات في ظل الظروف الفسيولوجية.

Introduction

المقايسات الحالية لدراسة الخلية إلى خلية والتفاعلات خلية الجسيمات تنطوي عادة ثابتة شكل لوحة جيدا التي يتم تحضين الخلايا على جسيمات أو مصفوفات البروتين أو الخلايا الملتصقة. في نهاية فترة حضانة معينة، وكمية أعداد الجزيئات الملتصقة أو الخلايا باستخدام المجهر 1. على الرغم من هذه المقايسات توفير نظرة كبيرة في العمليات البيوكيميائية وراء هذه التفاعلات، وجود قيود المفتاح هو عدم وجود تدفق السوائل الفسيولوجية (نموذجي من دوران الأوعية الدقيقة) وتأثيره على الجسيمات الالتصاق.

للتغلب على هذا القيد، وقد وضعت في المختبر غرف تدفق في السنوات الأخيرة. والعنصر المشترك من هذه الدوائر تدفق هو جهاز شفاف perfused في انخفاض أعداد رينولدز لتتناسب معدلات القص الجدار لوحظت في الأوعية الدموية في الجسم الحي 2. وعلى غرار جدار الوعاء الدموي إما عن طريق طلاء من الجزيئات الحيوية أو نمو الخلايا على سطح واحد من تدفق جهامبر 3. جزيئات أو خلايا 4-7 8-16 ثم يتم تدفقت في في النطاق المطلوب من معدلات التدفق لقياس عدد من التمسك الجسيمات تحت مختلف معدلات القص.

ومع ذلك، فإن استخدام لوحة موازية غرف تدفق للدراسة والتحقق من صحة الظواهر البيوكيميائية غير مكلفة نوعا ما وتستغرق وقتا طويلا. ويرجع ذلك أساسا إلى حقيقة أن تجارب متعددة تحتاج إلى أن تجرى لتوليد خريطة للالقص فلويديك مقابل عدد الجسيمات / خلايا الالتزام بذلك. بالإضافة إلى ذلك، تدفق غرف لوحة تتطلب كميات كبيرة من الكواشف بسبب الحجم الكبير منها (ارتفاع> 250 ميكرون وعرض> 1 مم). أخيرا، وهذه الأجهزة لا نموذج بدقة ملامح هندسية (على سبيل المثال، التشعبات) وظروف التدفق (على سبيل المثال، تتلاقى مقابل متباينة التدفقات) التي تكون موجودة في الجسم الحي.

وقد تسارعت التطورات الحديثة في الطباعة الحجرية القائمة على التصنيع الدقيق 17-19 مجال المختبر على واحد في رقاقةالأجهزة 20-21. وكانت هذه الأجهزة دور أساسي في تطوير نسخة مصغرة من غرفة تدفق موازية لوحة ذات أبعاد في نظام ميكرومتر. التخفيض في البعد ينتج أيضا فوائد كبيرة من حيث حجم الكواشف، والخلايا أو الجسيمات المطلوبة لإجراء التجارب. ومع ذلك، وجود قيود رئيسية من الأجهزة المتوفرة حاليا هي استخدام القنوات الخطية لنموذج microvessels، والتي لا تحاكي الأوعية الدموية الدقيقة المعقدة التي لوحظت في الجسم الحي.

وقد وضعنا مؤخرا منهجية جديدة لإعادة شبكات الاوعية الدموية الدقيقة على ركائز من البلاستيك القابل للتصرف يؤدي إلى تمثيل الاصطناعية للظروف في الجسم الحي. ووصف هذه الأجهزة يتم تطوير شبكات الاوعية الدموية الدقيقة SynVivo الاصطناعية (اس ام) باستخدام PDMS تستند عملية الطباعة الحجرية الناعمة. ويمكن استخدام أجهزة SynVivo-اس ام ان للحصول على خريطة التصاق القص من الخلايا / الجسيمات التصاق 22، استهدفت الدراسة تقديم الأدوية و23 ساعةافي تم التحقق من صحة البيانات في الجسم الحي ضد 24-25. في هذه الورقة، نقدم البروتوكول الذي تمكن الجيل من الخريطة التصاق القص من تجربة واحدة في أحجام صغيرة مثل 1-5 ميكرولتر مما يؤدي إلى وفورات كبيرة من الموارد والوقت.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. فتيلة الجهاز ميكروفلويديك SynVivo-SMN

  1. وتتألف كل منفذ (مدخل / مخرج) من الجهاز اثنين من المنافذ المتوازية - واحد لتتدفق في الأنصاف طلاء السطح (جزيئات الالتصاق، مصفوفات النمو، الخ) و / أو خلايا للبذار والآخر لتشغيل الفحص (الشكل 1A ).
  2. يغرق تماما SynVivo-اس ام ان الجهاز ميكروفلويديك (الشكل 1B) في طبق بتري تحتوي منزوع الأيونات معقمة (DI) المياه ووضع الطبق في مجفف فراغ. تسمح المجفف لتشغيل حتى يتم إزالة كل من الهواء من القنوات للجهاز. هذا ينبغي أن يستغرق حوالي 15 دقيقة.
  3. قبل إزالة الجهاز من المياه، ووضع أنابيب Tygon (OD 0.06 "ومعرف 0.02") معبي مع الماء في كل منفذ من الجهاز مع ملقط غرامة نقطة. يجب أن يكون الأنبوب حوالي 1 بوصة في الطول. ويمكن الآن إزالة الجهاز من الماء. يبين الشكل 1C صورة ديفيتشالبريد مع الأنابيب.

2. طلاء الجهاز ميكروفلويديك مع البروتين المطلوب (على سبيل المثال، أفيدين)

  1. باستخدام ماصة، ضع قطرة من الماء (حوالي 100 ميكرولتر) حول قاعدة الأنبوب منفذ مدخل واحد. إزالة بعناية أنابيب تستخدم لرئيس الجهاز. فإن قطرة ماء منع الهواء من الدخول إلى الجهاز.
  2. تحضير حقنة 1 مل محملة أفيدين في تركيز 20 ميكروغرام / مل. ربط الحقنة إلى 24 G إبرة الفولاذ المقاوم للصدأ والأنابيب. إدراج أنابيب إلى واحدة من الموانئ مدخل الجهاز. المشبك مدخل الميناء لا تستخدم مع المشبك الفك.
  3. حقن أفيدين بمعدل تدفق من 1 ميكرولتر / دقيقة لمدة 10 دقيقة للسماح نضح كاملة من الجهاز. في نهاية الوقت التدفق، المشبك الأنابيب مع المشبك الفك ووضع الجهاز على 4 درجات مئوية خلال الليل.

3. يتدفق على البيروكسيديز الجسيمات لتجارب التصاق

  1. يسمح الجهاز لتأتي إلى درجة حرارة الغرفة. وضع الجهاز على مجهر مضان مقلوب مجهزة مرحلة الآلية وكاميرا عالية الأداء.
  2. يعد حل من 2 ميكرون البيروكسيديز بتركيز 5 × 10 6 الجسيمات / مل في الفوسفات عازلة المالحة (PBS). تحميل الجزيئات إلى حقنة 1 مل. يعد الثاني حقنة 1 مل من برنامج تلفزيوني فقط. تحميل كل حقنة على ضخ حقنة والاتصال الإبرة والأنابيب.
  3. باستخدام ماصة، ضع قطرة من الماء (حوالي 100 ميكرولتر) حول قاعدة أنابيب مدخل الميناء. إزالة بعناية أنابيب تستخدم لمعطف الجهاز. فإن قطرة ماء منع الهواء من الدخول إلى الجهاز.
  4. إدراج أنابيب بعناية للجسيمات البيروكسيديز وPBS من الخطوة 3.2 في كل من الموانئ مدخل ويبين الشكل 2A صورة مجموعة المتابعة.
  5. بدء ضخ جزيئات البيروكسيديز بمعدل تدفق 2.5 ميكرولتر / دقيقة. مراقبة مدخل الميناء على المجهر. في أول بادرةمن الجزيئات، يبدأ الموقت ويستمر تدفق لمدة 3 دقائق.
  6. في نهاية دقيقة 3، ووقف تدفق الجسيمات البيروكسيديز حين يحدق في وقت واحد تدفق PBS بمعدل تدفق 2.5 ميكرولتر / دقيقة. يسمح برنامج تلفزيوني في التدفق في الجهاز لمدة 3 دقائق ليغسل الجزيئات غير منضم.

4. الحصول على الصور وجعل مجال الاهتمام (الهيئة) القياسات عن طريق برامج التصوير (NIKON عناصر)

  1. استخدام "تفحص صورة كبيرة" وظيفة في برامج التصوير للحصول على صورة الجهاز بأكمله.
  2. عدد بالتتابع والتشعبات في الجهاز وإنشاء الهيئة دائرية مع ضعف القطر من القنوات. في هذه الحالة، تعيين الهيئة قطرها إلى 200 ميكرومتر منذ قطرها القناة 100 ميكرون.
  3. استخدام وظيفة العد الآلي في برامج التصوير لتصدير عدد من الجسيمات في كل الهيئة إلى ورقة إكسل.
  4. وبالمثل، استخدم ميزة العد الآلي لتصدير عدد من الجزيئات في كاملالجهاز.

5. الجسيمات تحليل الجريان عن طريق ديناميات الموائع الحسابية (CFD) نماذج

  1. يتم تشغيل المحاكاة CFD باستخدام البرمجيات المتاحة تجاريا (CFD-ACE +، ESI شركة) لطوبولوجيا الجهاز SynVivo-SMN. يتم تخزين النتائج في قاعدة بيانات لتحليل الملاحظات التجريبية. المعلومات مخزن نتائج المحاكاة على معدلات جدار القص، والسرعة، وتدفق الجسيمات، والتصاق في الجهاز.
  2. وتستخدم نتائج المحاكاة لتحديد عدد من الجزيئات التي تدخل كل الهيئة على أساس تركيز الجسيمات مدخل معين.

6. توليد القص التصاق خريطة

  1. حساب٪ من التصاق بتقسيم جزيئات الالتزام في التشعب من الجزيئات المتدفقة في التشعب كما هو مبين في المعادلة 6.1.
    المعادلة 1
    حيث يتم الحصول على عدد الجسيمات والجسيمات الالتزام المتدفقة من عrotocol الخطوات 4.3 و 5.2 على التوالي.
  2. رسم خريطة القص التصاق باستخدام معدل القص في كل التشعب من الشبكات التي تم الحصول عليها من قاعدة البيانات في الخطوة (5.1) والقيم التصاق٪ تم الحصول عليها من المعادلة 6.1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويبين الشكل 1A التخطيطي وصورة مشرقة من حقل جهاز SynVivo-SMN. ويبين الشكل 1B الجهاز SynVivo-اس ام التي شنت على شريحة زجاجية. ويبين الشكل 1C الجهاز مع أنابيب التالية فتيلة مع الماء في مجفف فراغ.

الرقم 2A يظهر صورة التجريبية-اقامة. الشكل 2B يظهر المغلفة أفيدين الجهاز SynVivo-SMN النموذجية التالية ملزمة من 2 ميكرون البيروكسيديز. نلاحظ أن الجسيمات التمسك تفضيلي بالقرب من التشعبات في الشبكة.

ويبين الشكل 3A والتشعبات مرقمة في شبكة SynVivo-SMN. ويبين الشكل 3B الجدار عينة القص الخريطة التي تم إنشاؤها بواسطة نموذج CFD للجهاز. معدل القص يختلف في الجهاز بدءا من 250 ثانية إلى 15 ثانية -1 -1 كما لوحظ في الأوعية الدموية الدقيقة في الجسم الحي. لاحظ أن هذه متفاوتةلا يمكن الحصول على معدلات القص في وقت واحد في القنوات ميكروفلويديك الخطية لأنها توفر معدل القص المستمر لكل معدل التدفق. ويبين الشكل 3C مؤامرة لقيم معدل القص في كل من التشعبات للشبكة. تظهر البيانات أن معدل القص أنماط معقدة ولا يمكن الحصول عليها مع علاقة تحليلية بسيطة على عكس قنوات تدفق الخطية. علاوة على ذلك، التشعبات المتعددة (AOIs) موجودة في الشبكة التي تقع في نفس القص بن، إضافة إلى الثقة الإحصائية للبيانات.

الرقم 4A يظهر نتائج العينة للتحليل CFD لتدفقات الجسيمات في الشبكة التي تستخدم لحساب تدفقات الجسيمات في الفروع والتشعبات شبكة تجريبية. ويبين الشكل 4B الخريطة التصاق القص حسابها من التجربة SynVivo-اس ام ان واحد. خرائط القص التصاق يتبع علاقة عكسية كما لوحظ من القص الخريطة تم الحصول عليها من التصاق التجارب قناة الخطية. ومع ذلك، وعلى النقيض باستخدام مقايسة SynVivo، تجربة واحدة يسمح جيل من هذه الخريطة القص على عكس أشواط تجريبية متعددة المطلوبة من القنوات الخطية مما أدى إلى وفورات كبيرة من الوقت والموارد. لاحظ أنه يتم تشغيل التجارب في يثلث للتحليل الإحصائي القصوى.

الشكل 1
الشكل 1. الأجهزة SynVivo-SMN. اللوحة اليسرى (الشكل 1A) يظهر التخطيطي للجهاز. اللوحة اليمنى (الشكل 1A) يظهر صورة مشرقة الحقل من الجهاز. يبين الشكل 1B الجهاز SynVivo-اس ام التي شنت على شريحة زجاجية المجهر. يبين الشكل 1C الجهاز مع Tygon ™ أنابيب موصولة إلى الموانئ مدخل / مخرج التالية فتيلة مع الماء.

r.within صفحة = "دائما"> الرقم 2
الشكل 2. نموذجي مقايسة التصاق في SynVivo-SMN. ويبين الشكل 2A صورة التجريبية-اقامة. الشكل 2B يبين الجسيمات البيروكسيديز التالية ملزمة في الجهاز. لاحظ أنه تم العثور على الجسيمات التصاق لتكون مترجمة بالقرب من التشعب مقارنة مع فروع الشبكة.

الرقم 3
الشكل 3. تحليل القص في SynVivo-SMN. ويبين الشكل 3A جميع التشعبات مرقمة في الشبكة وجهة نظر تضخيم من التشعبات من التجارب. ويبين الشكل 3B الخريطة النوعي القص الجدار في التشعبات في الشبكة. الشكليظهر 3C المعلومات الكمية على القص في الفروع في الشبكة. لاحظ أن أنماط القص في شبكة معقدة وتغطي نطاقات الفسيولوجية لمعدلات القص (0-240 ثانية -1) وجدت في الجسم الحي.

الرقم 4
الشكل 4. جيل من القص خريطة الالتصاق. الشكل 4A يسلط الضوء على مسارات الجسيمات (كما هو موضح باللون الأبيض) في الشبكات التي تم الحصول عليها من محاكاة CFD. هذه المسارات هي آخر المصنعة للحصول على تدفقات الجسيمات في مختلف الفروع والتشعبات. ويبين الشكل 4B الخريطة التصاق القص تم الحصول عليها من تجربة SynVivo-اس ام ان واحد.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

بالتوازي غرف تدفق لوحة، في الوقت الذي توفر أفكارا هامة في خلية خلية وخلية الجسيمات التفاعلات، يعانون من العديد من القيود مثل ارتفاع استهلاك الكواشف والحاجة إلى أشواط تجريبية متعددة لإنشاء مخطط التصاق القص. استخدام شبكات الاوعية الدموية الدقيقة SynVivo الاصطناعية (SynVivo-SMNs) تمكن من توليد خريطة التصاق القص من تجربة واحدة في ظروف محاكاة في ظروف الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك، يتم الحصول أيضا تحقيق وفورات كبيرة (> 95٪) في الكواشف.

أهم خطوة في إدارة الجسيمات التجارب التصاق مع SynVivo-SMN هو ضمان ظروف خالية فقاعة في رقاقة قبل التجريب. سيكون مقدمة من الفقاعات يؤدي إلى تدفق عدم الاستقرار وانعدام فرص الحصول على "الهواء مؤمن" مناطق رقاقة. وبالتالي، يحتاج إلى رعاية كبيرة لاتخاذها خلال الإدراج والاستخراج من الأنابيب من موانئ الجهاز. في حالة وجود فقاعة جدت في الجهاز البريد خلال الخطوة فتيلة، يمكن للمرء أن تكرار الخطوة فتيلة مرة أخرى لإزالة الفقاعات. بدلا من ذلك، يمكن للمرء أن تتدفق في وسائل الإعلام / الكواشف في انخفاض معدلات تدفق (0.1 ميكرولتر / دقيقة أو أقل) لضمان فقاعة مجانا فتيلة من الجهاز.

القيد الرئيسي للبروتوكول هو رقاقة يجري المقدمة غير صالحة للاستعمال التالية وجود الفقاعة التي لا يمكن إزالتها. ومع ذلك، مع ممارسة الحذر واحدة يمكن أن تؤدي التجارب مع قرب نجاح 100٪. أيضا، وتوليد القص خريطة التصاق يتطلب الحصول على معلومات من النماذج CFD. ومع ذلك، قاعدة بيانات حسابها مسبقا من نتائج CFD لظروف تدفق مختلفة يمكن التغلب عليها بسهولة الحاجة لأداء المحاكاة CFD.

وعلى الرغم من المنهجية المقدمة هنا تستخدم نظام أفيدين البيوتين لسهولة مظاهرة، أي مزيج يجند مستقبلات على جزيئات أو خلايا يمكن استخدامها لتكون دراسة الجسيمات السطح أو التفاعلات سطح الخلية في الوقت الحقيقي في الجهاز. علاوة على ذلك، يمكن خلايا مكعبltured في الجهاز لدراسة الجسيمات الخلية وخلية خلية التفاعلات. سوف ثقافة الخلايا تتطلب طلاء قنوات الجهاز مع مصفوفة مناسبة لأنواع الخلايا المطلوبة. على سبيل المثال، والخلايا البطانية يمكن تربيتها على القنوات فبرونيكتين المغلفة. بعد التقاء، والخلايا البطانية ويمكن تفعيلها باستخدام TNF-α أو السيتوكينات الأخرى ذات الصلة. خلايا الدم البيضاء (الكريات البيضاء) ويمكن حقن وتفاعلاتها على تنشيط الخلايا البطانية يمكن دراستها في الوقت الحقيقي. على غرار بروتوكول أثبت في هذه الدراسة، وخريطة القص التصاق خلايا الدم البيضاء يمكن أن تتولد بسهولة من تجربة واحدة.

بروتوكول المذكورة في هذه الورقة يمكن استخدامها لدراسة تأثير الشبكة على التشكل التصاق الجسيمات / خلية كنموذج للظروف في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك، تأثير تدفق الجسيمات على الالتصاق / خلية والسلوك الخلوي لنمذجة الظروف الفسيولوجية ويمكن أيضا أن يتم تقييم بسهولة. أخيرا، يمكن للبروتوكول أن يكون لناإد لدراسة تقديم الأدوية وفعالية لاستهداف التسليم للسكان الخلوية المطلوب.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

رسوم النشر على هذا المقال برعاية مؤسسة البحوث CFD.

Acknowledgments

وقد تم تطوير تكنولوجيا SynVivo تحت منحة # 2R44HL076034 من NHLBI.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SynVivo-SMN CFD Research SMN-001 Exclusive at CFDRC
CFD-ACE+ ESI Inc. N/A
Avidin Invitrogen 43-4401 Any avidin source will work for this assay
Biotinylated Particles Polysciences 24173-1 Any source of biotinylated particles will work for the assay
Tygon Tubing VWR 63018-044 Size is typical for use with SynVivo-SMN
NIKON Elements NIKON Instruments N/A Any other imaging software can be used

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weitz-Schmidt, G., Chreng, S. Cell adhesion assays. Methods Mol Biol. 757, 15-30 (2012).
  2. Parsons, S. A., Jurzinsky, C., Cuvelier, S. L., Patel, K. D. Studying leukocyte recruitment under flow conditions. Methods Mol Biol. 946, 285-300 (2013).
  3. Luscinskas, F. W., Gimbrone, M. A. Jr Endothelial-dependent mechanisms in chronic inflammatory leukocyte recruitment. Annu Rev Med. 47, 413-421 (1996).
  4. Adriani, G., et al. The preferential targeting of the diseased microvasculature by disk-like particles. Biomaterials. 33, 5504-5513 (2012).
  5. Decuzzi, P., et al. Flow chamber analysis of size effects in the adhesion of spherical particles. Int J Nanomedicine. 2, 689-696 (2007).
  6. Zou, X., et al. PSGL-1 derived from human neutrophils is a high-efficiency ligand for endothelium-expressed E-selectin under flow. Am J Physiol Cell Physiol. 289, 415-424 (2005).
  7. Sakhalkar, H. S., et al. Leukocyte-inspired biodegradable particles that selectively and avidly adhere to inflamed endothelium in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 15895-15900 (2003).
  8. Van Kruchten, R., Cosemans, J. M., Heemskerk, J. W. Measurement of whole blood thrombus formation using parallel-plate flow chambers - a practical guide. Platelets. 23, 229-242 (2012).
  9. Ganguly, A., Zhang, H., Sharma, R., Parsons, S., Patel, K. D. Isolation of human umbilical vein endothelial cells and their use in the study of neutrophil transmigration under flow conditions. J Vis Exp. 66 (66), (2012).
  10. Shirure, V. S., Reynolds, N. M., Burdick, M. M. Mac-2 binding protein is a novel E-selectin ligand expressed by breast cancer cells. PLoS One. 7, (2012).
  11. Ploppa, A., Schmidt, V., Hientz, A., Reutershan, J., Haeberle, H. A., Nohé, B. Mechanisms of leukocyte distribution during sepsis: an experimental study on the interdependence of cell activation, shear stress and endothelial injury. Crit Care. 14, 201 (2010).
  12. Oh, H., Diamond, S. L. Ethanol enhances neutrophil membrane tether growth and slows rolling on P-selectin but reduces capture from flow and firm arrest on IL-1-treated endothelium. J Immunol. 181, 2472-2482 (2008).
  13. Resto, V. A., Burdick, M. M., Dagia, N. M., McCammon, S. D., Fennewald, S. M., Sackstein, R. L-selectin-mediated lymphocyte-cancer cell interactions under low fluid shear conditions. J Biol Chem. 283, 15816-15824 (2008).
  14. Enders, S., Bernhard, G., Zakrzewicz, A., Tauber, R. Inhibition of L-selectin binding by polyacrylamide-based conjugates under defined flow conditions. Biochim Biophys Acta. 1770, 1441-1449 (2007).
  15. Prabhakarpandian, B., Goetz, D. J., Swerlick, R. A., Chen, X., Kiani, M. F. Expression and functional significance of adhesion molecules on cultured endothelial cells in response to ionizing radiation. Microcirculation. 8, 355-364 (2001).
  16. Brown, D. C., Larson, R. S. Improvements to parallel plate flow chambers to reduce reagent and cellular requirements. BMC Immunology. 2, 9 (2001).
  17. Zheng, W., Zhang, W., Jiang, X. Precise control of cell adhesion by combination of surface chemistry and soft lithography. Adv Healthc Mater. 2, 95-108 (2013).
  18. Qian, T., Wang, Y. Micro/nano-fabrication technologies for cell biology. Med Biol Eng Comput. 48, 1023-1032 (2010).
  19. Biswas, A., Bayer, I. S., Biris, A. S., Wang, T., Dervishi, E., Faupel, F. Advances in top-down and bottom-up surface nanofabrication: techniques, applications & future prospects. Adv Colloid Interface Sci. 170, 2-27 (2012).
  20. Whitesides, G. M., Ostuni, E., Takayama, S., Jiang, X., Ingber, D. E. Soft lithography in biology and biochemistry. Annu Rev Biomed Eng. 3, 335-373 (2001).
  21. McDonald, J. C., et al. Fabrication of microfluidic systems in poly(dimethylsiloxane). Electrophoresis. 21, 27-40 (2000).
  22. Prabhakarpandian, B., et al. Synthetic microvascular networks for quantitative analysis of particle adhesion. Biomed Microdevices. 10, 585-595 (2008).
  23. Rosano, J. M., et al. A physiologically realistic in vitro model of microvascular networks. Biomed Microdevices. 11, 1051-1057 (2009).
  24. Tousi, N., Wang, B., Pant, K., Kiani, M. F., Prabhakarpandian, B. Preferential adhesion of leukocytes near bifurcations is endothelium independent. Microvasc Res. 80, 384-388 (2010).
  25. Prabhakarpandian, B., et al. Bifurcations: focal points of particle adhesion in microvascular networks. Microcirculation. 18, 380-389 (2011).

Tags

الهندسة الحيوية، العدد 87، الجسيمات، التصاق، والقص، على microfluidics، الأوعية الدموية، والشبكات
جيل من القص التصاق خريطة طريق SynVivo شبكات الاوعية الدموية الدقيقة الاصطناعية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Smith, A. M., Prabhakarpandian, B.,… More

Smith, A. M., Prabhakarpandian, B., Pant, K. Generation of Shear Adhesion Map Using SynVivo Synthetic Microvascular Networks. J. Vis. Exp. (87), e51025, doi:10.3791/51025 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter