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घोड़े tendinopathy में अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम सेल लेबल टेक्नेटियम -99 m के vivo इमेजिंग और ट्रैकिंग में

Published: December 9, 2015 doi: 10.3791/52748
Automatic Translation
1, 2, 2, 2, 3, 1
1Department of Clinical Science and Services, The Royal Veterinary College, 2Hospital de Referencia La Equina, Manilva, 3Department of Nuclear Medicine, Barts & The London NHS Trust

Abstract

घोड़े में पट्टा और बंध चोट के इलाज के लिए अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम सेल (BMMSC) के आवेदन में हाल के अग्रिमों प्रयोगात्मक और नैदानिक ​​अध्ययन दोनों में परिणाम उपायों में सुधार का सुझाव देते हैं। BMMSC बड़ी संख्या में कण्डरा घाव में प्रत्यारोपित कर रहे हैं (हालांकि आमतौर पर 10-20,000,000 कोशिकाओं), केवल एक अपेक्षाकृत छोटी संख्या जीवित रहने के (<10%) इन आरोपण के बाद अप करने के लिए 5 महीने के लिए जारी रहती सकता है। इस BMMSC अन्य ऊतकों में प्रत्यारोपित किया गया है, जहां अन्य प्रजातियों में एक आम अवलोकन प्रतीत होता है और इस नुकसान कई प्रारंभिक आरोपण प्रक्रिया कैसे जीवित और कोशिकाओं के अन्य अंगों में मंजूरी दे दी है कि क्या होता है, जब यह समझना महत्वपूर्ण है। कोशिकाओं के भाग्य ट्रैकिंग सेल स्थान और सेल नंबर की मात्रा का ठहराव के vivo इमेजिंग में गैर इनवेसिव अनुमति देता है जो दाखिल करने से BMMSC से पहले radiolabeling द्वारा प्राप्त किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल एक सेल labeli का वर्णनघोड़ों में घायल flexor tendons में टेक्नेटियम -99 m (टीसी -99 m), और आरोपण के बाद इन कोशिकाओं की ट्रैकिंग का उपयोग करता है कि एनजी प्रक्रिया। टीसी -99 m गामा किरणों का उत्सर्जन करता है और lipophilic यौगिक hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO) की उपस्थिति में कोशिकाओं द्वारा भली भाँति जा सकता है कि एक अल्पकालिक (टी 1/2 6.01 के एचआर) आइसोटोप है। इन गुणों के कई विभिन्न रोगों के निदान के लिए परमाणु चिकित्सा क्लीनिक में उपयोग के लिए आदर्श बनाते हैं। लेबल की कोशिकाओं के भाग्य फेफड़े, थायराइड और अन्य अंगों में घाव और कोशिकाओं के वितरण में बनाए रखा कोशिकाओं की संख्या में दोनों यों की गामा सिन्टीग्राफी द्वारा अल्पावधि (36 घंटा तक) में किया जा सकता है। इस तकनीक में रक्त ल्यूकोसाइट्स की लेबलिंग से अनुकूलित है और अन्य अंगों में BMMSC प्रत्यारोपित छवि के लिए उपयोग किया जा सकता है।

Introduction

कोढ़ या क्षतिग्रस्त ऊतकों की मरम्मत के लिए पुनर्योजी रणनीतियों प्रभावित क्षेत्र में ऊतक की एक किस्म से ली गई है और प्रत्यारोपित multipotent स्टेम कोशिकाओं पर आधारित हैं। घोड़े में पट्टा और बंध चोट के इलाज के लिए ऑटोलॉगस BMMSC के आवेदन में हाल के अग्रिमों दोनों प्रयोगात्मक 1-5 में सुधार परिणाम उपाय और नैदानिक ​​अध्ययन 6 से पता चला है। घोड़े की यह उम्र से ग्रस्त है और बाहर का forelimb के tendons के लिए संबंधित चोटों overstrain, यह एक पुष्ट जानवर है क्योंकि उपचार संबंधी स्टेम सेल की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए एक विशेष रूप से आकर्षक मॉडल है, और यह एक बड़ी, को सुविधाजनक बनाने के अस्थि मज्जा वसूली है और सटीक आरोपण। कण्डरा चोटों फाइब्रोसिस के साथ स्वाभाविक रूप से ठीक है लेकिन चंगा कण्डरा 7 कार्यात्मक हीन है और फिर से चोट 8 के एक उच्च जोखिम है। यह एक लोचदार ऊर्जा के रूप में कार्य करने के लिए विकसित किया गया है के रूप में सतही डिजिटल flexor कण्डरा (SDFT) सबसे अधिक प्रभावित होता हैदुकान और अनुभवों को उच्च लोड ऊर्जा कुशल और उच्च गति हरकत को प्राप्त करने के लिए जोर दिया है। चोट के बाद समारोह को बहाल करना इसलिए महत्वपूर्ण है। इन चोटों एक समान कार्य 9 से करता है जो मानव में स्नायुजाल को प्रभावित करने के समान ही हैं। इसलिए सेल आधारित पुनर्योजी रणनीतियों परिणामों में सुधार करने के लिए और फिर से चोट को कम करने के लिए एक आकर्षक अवसर प्रदान करते हैं, इलाज के लिए या इस तरह की चोटों के लिए अच्छी मरम्मत को प्राप्त करने के लिए कोई अच्छा इलाज विकल्प हैं।

ज्यादातर अध्ययनों में 5-20,000,000 ऑटोलॉगस BMMSC आमतौर पर इसलिए कोशिकाओं के लिए एक गोदाम के रूप में कार्य करता है जो कण्डरा शरीर के कोर के भीतर होते हैं जो घाव में सीधे इंजेक्ट कर रहे हैं। एक बार इंजेक्शन कोशिकाओं के भाग्य कोशिकाओं हाल ही में वर्णित किया गया है ट्रैक करने के लिए स्पष्ट और अलग सेल लेबलिंग तरीकों नहीं है। एक प्रतिदीप्ति टैग के साथ लेबल की कोशिकाओं केवल अपेक्षाकृत कम संख्या (<10%) 10,11 में जीवित रहने के लिए दिखाया गया। प्रतिदीप्ति लेबलों की जरूरतसमय लगता है और नहीं करता है, जो ऊतकीय विश्लेषण के लिए ऊतक निष्कर्षण और सेक्शनिंग आसानी से एक बड़े पशु मॉडल में या नैदानिक ​​मामलों में अस्थायी विश्लेषण की सुविधा। अधिक हाल ही में काम में हम कोशिकाओं लेबल और गामा सिन्टीग्राफी 1 से उनके भाग्य का पालन करने के लिए रेडियो आइसोटोप 99m टीसी का इस्तेमाल किया है। इस विधि तेजी से तुलना की इंट्रा-धमनी 12 या नसों में 1,12 इंजेक्शन के माध्यम से गले नस 1 या क्षेत्रीय छिड़काव के माध्यम से नसों में intralesional सहित सेल वितरण के विभिन्न मार्गों के बीच किए जाने के लिए अनुमति देता है। कोशिकाओं की दृढ़ता और वितरण तो विभिन्न अंगों के गामा सिन्टीग्राफी से ली जा सकती है। यह कोशिकाओं का केवल 24% intralesionally 24 घंटा 1 से घाव में बने इंजेक्शन और इस प्रयोगात्मक बनाया घावों का उपयोग करते हुए और एक ही radiolabel 5 का उपयोग कर एक अन्य अध्ययन के द्वारा समर्थित है कि प्रदर्शन किया है। इसके अलावा, कोशिकाओं जब delivere कण्डरा घावों में घर के लिए सीमित क्षमता दिखानेनसों के क्षेत्रीय छिड़काव या द्वारा घ लेकिन बाद मार्गों 4 से फेफड़ों में बिखरे हैं।

लोहे नैनोकणों के साथ लेबल BMMSC forelimb tendons 13 में प्रत्यारोपित कोशिकाओं को ट्रैक करने के लिए एक वैकल्पिक तरीका है। लोहे nanoparticle लेबल की कोशिकाओं एमआरआई द्वारा विवो में सेल ट्रैकिंग की अनुमति है, एक बड़े जानवर में अस्थायी अध्ययनों संज्ञाहरण एमआरआई स्कैन प्रदर्शन करने के लिए हर समय बिंदु पर प्रशासित किया जा सकता है समय की संख्या सीमित कर रहे हैं। इसके अलावा, लोहे नैनोकणों कण्डरा शरीर में लेबल कोशिकाओं के प्रवास के बारे में जानकारी की सीमा जो एमआरआई पर hypointense हैं। इस्तेमाल किया जा सकता है कि अन्य radioisotopes ईण्डीयुम-111 शामिल हैं, लेकिन इस टीसी -99 m की तुलना में अब आधा जीवन का नुकसान (2.8 दिनों बनाम 6.0 घंटा) और उच्च गामा किरण उत्सर्जन ऊर्जा ग्रस्त है। ईण्डीयुम-111 14 के साथ लेबल जब इसके अलावा, सेल व्यवहार्यता कम होने की सूचना दी गई है। टीसी -99 m, दूसरे हाथ पर, नियमित तौर पर दोनों घोड़े और मानव परमाणु में प्रयोग किया जाता हैदवा परिधीय रक्त कोशिकाओं mononuclear लेबल और सिन्टीग्राफी द्वारा विवो में उनके वितरण का पालन करने के लिए। यह अपेक्षाकृत आसानी से कोशिकाओं के लिए, टीसी -99 m-HMPAO के रूप में, टेक्नीशियम बाध्य करने के लिए एक लिंकर अणु के रूप में HMPAO का उपयोग कोशिकाओं द्वारा लिया जा सकता है। टीसी -99 m-HMPAO BMMSC अच्छा व्यवहार्यता दिखाने के लिए और इन विट्रो 4 में पैदा कर सकते हैं लेबल। इस प्रोटोकॉल forelimb SDFT में प्राकृतिक रूप से उत्पन्न घावों में प्रत्यारोपित लेबलिंग और घोड़े का ऑटोलॉगस BMMSC की ट्रैकिंग का विवरण।

यह प्रोटोकॉल ही इरादा है एक अनुसंधान उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया जा रहा है कि नोट के लिए महत्वपूर्ण है। एक नैदानिक ​​चिकित्सकीय साधन के रूप में इसका उपयोग पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया गया है सेलुलर phenotype पर radiolabel के प्रभाव के रूप में की सिफारिश नहीं है।

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Protocol

यहाँ बताया मामलों Colegio de Veterinarios डे मैलेगा, स्पेन के पशु आचार और कल्याण समिति, और रॉयल पशु चिकित्सा कॉलेज, उत्तर Mymms, ब्रिटेन घोड़ों पर इस्तेमाल किया प्रक्रियाओं द्वारा दी एथिकल अनुमति निम्न प्रदर्शन किया गया हैं कि मंजूरी दे दी प्रोटोकॉल पर आधारित होते हैं आरोपण के बाद बेहोश करने की क्रिया, अस्थि-मज्जा आकांक्षा, इंट्रा-मांसल इंजेक्शन, क्षेत्रीय छिड़काव, नसों में इंजेक्शन, पोस्ट-प्रक्रियात्मक उपचार और दर्द प्रबंधन और निगरानी भी शामिल है जो स्टेम सेल आधारित चिकित्सा प्राप्त घोड़ों पर क्लिनिक में इस्तेमाल किया।

1. कुंजी व्यवस्था अग्रिम में किया जा करने के लिए

  1. संस्थागत नैतिकता और पशु कल्याण मंजूरी लेने और काम शुरू करने से पहले स्थानीय कानूनी आवश्यकताओं का पालन करें।
  2. कर्मियों की सुरक्षा के उचित स्तर और पर्यावरण और contam के निपटान सहित स्थानीय और कानूनी नियमों द्वारा निर्धारित रूप में विकिरण के साथ काम करने के लिए संस्थागत मंजूरी लेनीinated बर्बादी।
  3. निम्नलिखित शामिल किए जाने के मापदंड का उपयोग करें: forelimb और कण्डरा के भीतर एक दोष और दोष है, जिसके परिणामस्वरूप घावों की सतही flexor डिजिटल पट्टा करने के लिए एक गैर दर्दनाक overstrain चोट (tendinopathy या desmopathy) के साथ उपस्थित घोड़ों बरकरार पट्टा और / या paratenon से घिरा हुआ है ।
    नोट: इस तरह की चोटों और सेल प्रत्यारोपण के लिए घोड़ों के नैदानिक ​​तैयारी के लिए परीक्षा और निदान कहीं और 6,15 विस्तृत कर दिया गया है।
    नोट: घोड़ों की अस्थि मज्जा से निकाली गई BMMSC की संस्कृति में अलगाव और विस्तार पहले से 6,16 विस्तृत कर दिया गया है। घोड़े में SDFT चोटों के लिए BMMSC इंजेक्शन लगाने के लिए मौजूदा प्रोटोकॉल ऑटोलॉगस अस्थि मज्जा सतह पर तैरनेवाला (बीएमएस) के 16 मिलीलीटर 4 प्रति 10 लाख की कोशिकाओं का उपयोग करता है।
  4. उच्च मार्ग संख्या ग के साथ जुड़े संभावित सेलुलर phenotype या आनुवंशिक परिवर्तन से बचने के लिए इन विवो आरोपण के लिए अधिक से अधिक 4 मार्ग आया है कि कोशिकाओं का उपयोगएल।
  5. बीएमएस में कोशिकाओं की अपेक्षित संख्या उद्धार (4 में एक सर्द बॉक्स में 24 घंटा के भीतर - 8 ओ सी) सेल आरोपण प्रदर्शन किया जा रहा है, जहां पशु चिकित्सा क्लिनिक के लिए।
    नोट: अस्थि मज्जा सतह पर तैरनेवाला में mesenchymal स्टेम कोशिकाओं के नैदानिक ​​इस्तेमाल प्राधिकरण की आवश्यकता हो सकती ReCellerate इंक (यूएसए) और इसके उपयोग के स्वामित्व वाले एक पेटेंट प्रक्रिया है।
    नोट: टीसी -99 m एक अपेक्षाकृत कम आधा जीवन के साथ एक गामा emitter (140 कीव) है (6.0058 मानव संसाधन, इसलिए इसके बारे में लगभग 94% 24 घंटा में 99 टीसी की अपनी स्थिर प्रपत्र को decays)। गामा ऊर्जा घोड़े और जानवर से निपटने के कर्मियों दोनों को बहुत सीमित विकिरण जोखिम के समय में गामा कैमरा (सिन्टीग्राफी) और कम आधा जीवन परिणामों से पता लगाने के लिए उपयुक्त बनाता है। इस प्रोटोकॉल [HMPAO (सोडियम pertechnetate के रूप में) टीसी -99 m के साथ लेबल] टीसी -99 m-HMPAO का उपयोग कोशिकाओं की साइट पर लेबलिंग का वर्णन है।
  6. यह कोशिकाओं बुद्धि लेबलिंग के लिए दिया जाता है और प्रयोग किया जाता है कि इस तरह के आपूर्तिकर्ता से ताजा टीसी -99 m आदेशटीसी -99 m जनरेटर से क्षालन की 2 घंटा हीन। टीसी -99 m 1 मिलीलीटर समाधान (आपूर्तिकर्ता के मानक बफर) में 1 GBq के रूप में आपूर्ति की जाती है कि सुनिश्चित करें।
  7. आरटी पर सभी buffers का प्रयोग करें। लेबलिंग प्रक्रिया का प्रदर्शन, शराब के साथ साफ सभी उपकरणों के साथ एक आइसोटोप रोकथाम कमरे में कोशिकाओं और इमेजिंग (गामा सिन्टीग्राफी) का आरोपण से पहले काम शुरू करने के लिए पोंछे।

Forelimb कण्डरा के घोड़े और अल्ट्रासोनोग्राफी की 2. तैयारी

  1. समय बिंदु पर तो पहले (अस्थि मज्जा से aspirated जाता है) की चोट के लिए प्रवेश और कम से रिकार्ड अल्ट्रासाउंड स्कैन radiolabeled कोशिकाओं इंजेक्ट किया जाता है।
  2. घोड़े की एक दुकान में समान रूप से वजन असर के साथ और (बजाय सामान्य संज्ञाहरण की तुलना में) बेहोश करने की क्रिया खड़े तहत अल्ट्रासोनोग्राफी और सेल आरोपण प्रदर्शन करते हैं। 0.01-0.02 मिलीग्राम / किग्रा चतुर्थ पर detomidine एचसीएल और butorphanol टारट्रेट का एक मिश्रण है, प्रत्येक का उपयोग कर बेहोश करने की क्रिया प्रशासन।
    नोट: रिकवरी तेजी से और शल्य चिकित्सा के बाद है इलाज कोई आवश्यकताविशेष ध्यान।
  3. Perineural संज्ञाहरण प्रभावित अंग में (2.6 चरण) लागू किया जाता है, के बाद उपचार के दौरान घोड़े के आंदोलन को कम करने के लिए बेहोश करने की क्रिया के तहत स्टेशन पर घोड़ा रखना। दिखने में उतारा सिर की स्थिति और घोड़े के आचरण से और घोड़े सेल इंजेक्शन और scintigraphic छवियों के अधिग्रहण के दौरान गामा कैमरा के आंदोलनों के दौरान सहज है कि न्याय किया बेहोश करने की क्रिया के उचित स्तर की जाँच करें।
    नोट: यह क्योंकि बेहोश करने की क्रिया निमिष तहत आँखें (सूखापन को रोकने के लिए) पर पशु चिकित्सक मरहम लागू करने के लिए प्रभावित नहीं है आवश्यक नहीं है और घोड़े आंखों के जलयोजन बनाए रखने में सक्षम है। कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के बाद निगरानी गैर इनवेसिव (अल्ट्रासाउंड और गामा सिन्टीग्राफी) है।
  4. क्लिप बारीकी (घोड़े के बाल कतरनी के साथ) कण्डरा overlying बाल फिर अंत में शराब एक एक chlorhexidine शल्य साफ़ के संयोजन और का उपयोग कर काटा क्षेत्र को साफ।
  5. क्षेत्र के लिए ध्वनिक युग्मन जेल लागू करें औरसीरियल पर घटना अनुप्रस्थ और अनुदैर्ध्य छवियों को प्राप्त करने के लिए एक रेखीय ट्रांसड्यूसर (12 मेगाहर्ट्ज या समान) के साथ, 7 17 - पूरा पलमार करभिकास्थिक क्षेत्र के स्कैन, क्रमिक रूप से लेबल स्तरों 1 रिकॉर्ड करने के लिए प्रक्रिया को स्कैन। पार के अनुभागीय क्षेत्र और अधिक से अधिक चोट जोन 4 छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर की सहायता से प्राप्त किया जा सकता है, ताकि डिजिटली छवियों की दुकान।
  6. पट्टा और सतही डिजिटल flexor कण्डरा overlying त्वचा की पूरी desensitization सुनिश्चित करने के लिए स्थानीय संवेदनाहारी की सड़न रोकनेवाला इंजेक्शन के लिए कलाई को तुरंत बाहर का पलमार नसों overlying क्षेत्र तैयार। Mepivicaine के 2 मिलीलीटर subcutaneously और (उनके उप-प्रावरणीय स्थान में) पलमार नसों से सटे flexor tendons के बीच और अंग के दोनों किनारों पर कलाई को तुरंत बाहर का लटकानेवाला बंधन दोनों इंजेक्षन।
  7. प्रारंभिक स्कैन एक chlorhexidine शल्य चिकित्सा के साथ क्षेत्र की स्क्रबिंग से आरोपण साइट तैयार किया गया है एक बारcrub कम से कम 5 मिनट के लिए समाधान और अंत में शराब लथपथ धुंध के साथ। एक सड़न रोकनेवाला फैशन में बाद के सभी चरणों को पूरा करें।

घोड़े mesenchymal स्टेम सेल के 3. टीसी -99 m लेबलिंग

नोट: सेल लेबलिंग कदम कण्डरा में सेल लेबलिंग और लेबल की कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के बीच इस कम कर देंगे आइसोटोप क्षय के रूप में forelimb के अल्ट्रासोनोग्राफी के दौरान किया जा सकता है।

  1. यह आइसोटोप के तेज के साथ हस्तक्षेप के रूप में कोशिकाओं से बीएमएस निकालें। ऐसा करने के लिए, सर्द बॉक्स से BMMSC की शीशी (बीएमएस के 1 मिलीलीटर में 10 लाख कोशिकाओं) को पुनः प्राप्त और आरटी पर 5 मिनट के लिए 350 XG पर एक microcentrifuge में गोली कोशिकाओं। ध्यान से सेल मेजबान सहायता करने के लिए ट्यूब में एक छोटी सी बूंद (≤0.1 एमएल) छोड़ रहा है, एक 18G या (2 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी) 19G सुई के साथ सतह पर तैरनेवाला हटा दें। एक बाँझ microcentrifuge ट्यूब में सतह पर तैरनेवाला (बीएमएस) को बचाने और बाद में फिर से उपयोग के लिए बर्फ पर रहते हैं।
  2. फ्लोरिडा से सतह पर तैरनेवाला के अवशिष्ट छोटी बूंद में कोशिकाओं Resuspend(बल्कि भंवर से) उंगलियों के साथ धीरे ट्यूब Icking और आरटी पर एक रैक में ट्यूब छोड़ दें। कोशिकाओं को पूरी तरह resuspended हैं और कोई दिखाई सेल झुरमुटों देखते हैं कि सुनिश्चित करें।
  3. इस प्रकार के रूप टीसी -99 m तैयार करें। टेक्नीशियम का स्थानांतरण 1 मिलीलीटर 1 मिलीलीटर सिरिंज और सुई का उपयोग HMPAO की एक शीशी में pertechnetate। धीरे लेकिन अच्छी तरह मिक्स और नेतृत्व परिरक्षण के पीछे 5 मिनट के लिए छोड़ दें। नोट: कोशिकाओं 2.1 चरण में घूम रहे हैं, जबकि इस कदम किया जा सकता है।
  4. कोशिकाओं के लिए एक 1 मिलीलीटर सिरिंज और सुई का उपयोग टीसी -99 m-HMPAO मिश्रण के सभी जोड़ें और धीरे मिश्रण। नेतृत्व परिरक्षण के पीछे आरटी पर 30 मिनट के लिए सेते हैं।
  5. अगले कदम के लिए, आइसोटोप (दस्ताने) अंगूठे के प्रदूषण और बाद में अन्य उपकरणों को कम करने के microcentrifuge ट्यूब का ढक्कन खोलने के लिए एक संदंश (या टिशू पेपर का एक टुकड़ा) का उपयोग करें। जोड़ सकते हैं या धो बफर दूर करने के लिए एक 2 मिलीलीटर सिरिंज और 21 जी सुई का प्रयोग करें।
    नोट: एक क्षेत्र आइसोटोप की निगरानी के उपयोग सतहों और उपकरणों के प्रदूषण पर नजर रखने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है। ढक्कन बंद धीरे मिश्रण और स्पिन 3.1 कदम के रूप में गोली कोशिकाओं के लिए, टीसी -99 m-HMPAO सेल मिश्रण करने के लिए 1 मिलीलीटर पीबीएस जोड़ें।
  6. ध्यान से एक नया ट्यूब (W1 के रूप में नेतृत्व परिरक्षण और लेबल के पीछे इस बचाने के लिए) के लिए पीबीएस निकालें। ताजा पीबीएस के 1 मिलीलीटर में सेल गोली Resuspend। ट्यूब अपकेंद्रित्र और (डब्ल्यू 2 के रूप में इस और लेबल बचाने के लिए) से ऊपर के रूप में सतह पर तैरनेवाला हटा दें।
  7. W1 और डब्ल्यू 2 ट्यूबों में और सेल गोली में गिना जाता है मापने के द्वारा लेबलिंग की दक्षता की गणना। एक अच्छी तरह से आइसोटोप खुराक अंशशोधक साधन में प्रत्येक ट्यूब रखने और मिनट (सीपीएम) के अनुसार मायने रखता है के रूप में रेडियोधर्मिता की रिकॉर्डिंग के द्वारा यह मत करो। (कोशिकाओं की सीपीएम के रूप में रेडियोधर्मिता) के रूप में लेबलिंग दक्षता की गणना / (रेडियोधर्मिता कोशिकाओं की सतह पर तैरनेवाला +) 100 x।
  8. बीएमएस 3.1 कदम से बचाया जोड़ने तो अवशिष्ट पीबीएस में अच्छी तरह से कोशिकाओं Resuspend और। कोशिकाओं intralesional आरोपण के लिए तैयार हैं।

टीसी -99 m-HMPAO लेबल की कोशिकाओं के 4. आरोपण

  1. Intralesional आरोपणअल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन में कण्डरा में
    1. धीरे धीरे सुई के साथ लाइन में एक 1.5 या 2 इंच (50 मिमी) एक बाँझ कपड़ा में कवर अल्ट्रासाउंड ट्रांसड्यूसर, के साथ एक अनुदैर्ध्य उन्मुखीकरण में घाव की अधिकतम चोट क्षेत्र में 20 जी सुई, परिचय सुई की लंबाई कर सकें सुई सही रूप में घाव के केंद्र में स्थित है, तो ultrasonographically पहचान की है और टिप हो।
    2. एक 2 मिलीलीटर सिरिंज में कोशिकाओं को इकट्ठा, उचित परिरक्षण का उपयोग करते हुए एक 20 जी सुई का उपयोग (luer ताला बाहरी संक्रमण के जोखिम और एक का नेतृत्व परिरक्षित सिरिंज कवर में कम से कम करने के लिए)। किसी भी तरल पदार्थ को खोना नहीं सावधान किया जा रहा सुई त्यागें। अब सुई कण्डरा में पूर्व स्थित पर लेबल की कोशिकाओं के साथ सिरिंज देते हैं।
    3. ऊतक में सुई पथ स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है तो यह है कि सुई के तहत अल्ट्रासाउंड जांच रखें। घाव में एक धीमी लेकिन स्थिर गति से कोशिकाओं इंजेक्षन। इंजेक्शन के लिए कोई विरोध नहीं है कि सुनिश्चित करें। इस सामना करना पड़ा हैध्यान से अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन में सुई का स्थान। घाव में तरल पदार्थ बाहर खदेड़ना hyperechogenic हवा के बुलबुले युक्त anechoic तरल पदार्थ के रूप में अल्ट्रासाउंड छवि पर दिखाई दे रहा है कि जाँच करें।
    4. सुई वापस लेने और तुरंत इंजेक्शन कोशिकाओं के नुकसान को रोकने के लिए और अंग की बाहरी सतह पर आइसोटोप के प्रसार को कम करने के लिए सुई के छेद पर दबाव जगह है। इसके तत्काल बाद autoadhesive पट्टी की एक परत के साथ अंग पोशाक। घोड़ा अब गामा सिन्टीग्राफी के लिए तैयार है। तुरंत इस प्रदर्शन करना।
      नोट: कण्डरा में कोशिकाओं को इंजेक्शन के बाद, सिरिंज में रह सकती है कि कोशिकाओं के संभावित प्रत्यक्ष नुकसान का आकलन करने के लिए खाली सिरिंज और सुई की गिनती हासिल।
  2. टीसी -99 m-HMPAO लेबल की कोशिकाओं के क्षेत्रीय छिड़काव
    1. 2.4 कदम का पालन करें।
    2. मध्यवर्ती और पार्श्व तैनात दो 100 मिमी कपास रोल धुंध पट्टी के साथ समीपस्थ हाथ की हथेली पर एक 100 मिमी रबर बंधन पट्टी लागू करें।
    3. Aseptically वें तैयारकम से कम 5 मिनट के लिए एक chlorhexidine शल्य साफ़ समाधान के साथ क्षेत्र की स्क्रबिंग से और अंत में शराब में भिगो धुंध के साथ पार्श्व समीपस्थ कण्डरास्थि के स्तर पर पार्श्व पलमार डिजिटल नस से अधिक ई त्वचा। एक सड़न रोकनेवाला फैशन में बाद के सभी चरणों को पूरा करें।
    4. Heparinized बाँझ खारा के साथ भरने के द्वारा venipuncture के लिए एक 21 जी x ¾ "(0.8 x 19 मिमी) तितली सुई के साथ सेट एक 100 मिमी विस्तार तैयार करें और फिर पार्श्व पलमार डिजिटल नस में सुई परिचय। नस में प्रवेश किया है, एक बार खून आंशिक रूप से विस्तार सेट भरना होगा। Luer ताला कनेक्टर पर लेबल कोशिकाओं के बाद इंजेक्शन की सुविधा के लिए एक Luer ताला रबर टोपी देते हैं।
    5. पीबीएस के साथ पहले से लोड एक 20 मिलीलीटर सिरिंज में कोशिकाओं को इकट्ठा करके पीबीएस के 19 मिलीलीटर में MSCs पतला। (- 40 सेकंड 30) एक 18 जी (1.2 x 40 मिमी) एक धीमी लेकिन स्थिर दर पर चमड़े के नीचे सुई का उपयोग रबर कप के माध्यम से कोशिकाओं को लागू करें। एक syring में पहले से लोड पीबीएस के 1 मिलीलीटर के साथ कैथेटर फ्लशई।
    6. पाँच 4 एक्स 4 कपास gauzes की एक परत के साथ सुई के छेद पर त्वचा पर दबाव लागू तुरंत सुई निकालें और। तब समीपस्थ तिल के आकार क्षेत्र से अधिक लोचदार चिपकने के साथ एक प्रकाश पट्टी जगह है और इंजेक्शन के बाद 30 मिनट के लिए जगह में बंधन छोड़ दें।
    7. 30 मिनट के बाद बंधन रिलीज। घोड़ा अब गामा सिन्टीग्राफी के लिए तैयार है।
      नोट: कोशिकाओं को इंजेक्शन के बाद, सिरिंज में रह सकती है कि कोशिकाओं के संभावित प्रत्यक्ष नुकसान का आकलन करने के लिए खाली सिरिंज और सुई की गिनती हासिल।

5. गामा सिन्टीग्राफी

  1. सिन्टीग्राफी छवियों
    1. एक कम ऊर्जा, समानांतर छेद collimator के साथ सुसज्जित (एक 20% सममित विंडो का उपयोग कर 140 कीव विद्युतप्रकाशीय चरम पर सेट) एक गामा कैमरा के साथ तलीय सिन्टीग्राफी छवियों मोल।
      1. 2.2 कदम के रूप में बेहोश घोड़ों खड़े पर 0 समय के बाद सभी छवियों को प्राप्त करते हैं। 0 समय scintigram के बाद, आरोपण Si पर प्रकाश पट्टी की जगहएक गद्देदार पट्टी के साथ ते। प्रत्येक सिन्टीग्राफी परीक्षा करने से पहले इस पट्टी निकालें।
      2. "अध्ययन चयन" - - "अधिग्रहण" के साथ प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर 60 सेकंड के प्रत्येक (256 से 256 मैट्रिक्स) के लिए स्थिर छवियों का मोल "हड्डी स्थिर" विकल्प। यह स्थिर मोड विकल्प आंदोलन के सुधार के लिए एक मॉड्यूल नहीं है क्योंकि घोड़ा छवि अधिग्रहण की अवधि के दौरान कदम नहीं करता है कि आवश्यक है।
      3. Intralesional इंजेक्शन के लिए, बाहर का सिरा को कलाई से घाव क्षेत्र से पार्श्व चित्र प्राप्त, contralateral अंग, बाएं फेफड़े क्षेत्र और छोड़ दिया थायराइड के बराबर क्षेत्र। आगे के हाथ छवियों के अधिग्रहण के दौरान, अंग contralateral की इमेजिंग से बचने के लिए पैरों के बीच एक का नेतृत्व स्क्रीन स्थिति। इंजेक्शन (समय 0) के बाद 5 मिनट पर छवियों का मोल है, और फिर 1, 3, 6, 12, 24, 36 और 48 घंटे में।
      4. क्षेत्रीय छिड़काव के लिए, 5.1.1.3 के लिए के रूप में पार्श्व और पृष्ठीय गामा चित्र प्राप्त। छवियों 5 मिनट वायुसेना प्राप्त करेंआतंकवाद बंधन रिहाई। यह तुरंत रिहाई बंधन करने से पहले मायने रखता आकलन करने के लिए कोशिकाओं को इंजेक्शन के बाद यह अंग छवि के लिए उपयोगी हो सकता है समय 0. हो जाएगा। कोशिकाओं के प्रशासन के बाद 1, 3, 6, 12, 24, 36 और 48 घंटे में गामा छवियों प्राप्त करते हैं।
    2. छवियों का अधिग्रहण किया गया है, इस प्रक्रिया को स्वयं "Sokoloff" रंग और "उलटा" रंग के लिए चयनित विकल्पों के साथ सॉफ्टवेयर की "संसाधन" विकल्प का उपयोग कर छवियों। इस घाव क्षेत्र पर चयन मुखौटा और आंदोलन के reshaping की अनुमति देता है के रूप में अगला "हित के क्षेत्र" (आरओआई) और "अंडाकार" का चयन करें। "आंकड़ों के जोड़" विकल्प का चयन करके आरओआई से ज्यादा मायने रखता है प्राप्त करते हैं। ब्याज (आरओआई) के उस हूबहू आकार क्षेत्रों अलग समय अंक पर प्रत्येक जानवर के लिए दर्ज कर रहे हैं सुनिश्चित करें।
    3. इसके बाद, हर समय बिंदु पर टेक्नीशियम की भविष्यवाणी क्षय के लिए मायने रखता है सही। क्षय के लिए सही करने के लिए निम्न समीकरण का उपयोग करें:एक = एक ई ओ - (0.693t / टी 1/2) क्षय बार शून्य पर रेडियोधर्मिता सुधारा ए ओ आइसोटोप की प्रारंभिक गतिविधि है, जहां एक है, टी गुजरे समय है और टी 1/2 आधा है आइसोटोप की -Life। उसके बाद निम्न सूत्र का उपयोग कर, शेष कोशिकाओं का प्रतिशत बाहर काम करने के लिए समय 0 पर रॉय के एक प्रतिशत के रूप में हर समय बिंदु पर सही मायने रखता एक्सप्रेस:

% कोशिकाओं शेष (टी) = 100 - {[(भविष्यवाणी क्षय (टी) - क्षय (टी)) / क्षय भविष्यवाणी (टी)]} 100 x

क्षय (टी) = रॉय (टी) / रॉय (0) 100 x।

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Representative Results

BMMSs में टीसी -99 m-HMPAO समावेश प्रतिकूल टिशू कल्चर प्लास्टिक का पालन करने की क्षमता को प्रभावित नहीं करता है और वे (चित्रा 1) monolayers के रूप में करने के प्रसार की क्षमता दिखाने जबकि हम प्रसार दरों या अन्य सेलुलर phenotypes प्रभावित कर रहे हैं कि क्या पूरी तरह से निर्धारित नहीं किया है। उनकी आकृति विज्ञान एक ठेठ धुरी के आकार के साथ लेबल हटाया कोशिकाओं के समान है। सेलुलर लेबलिंग दक्षता (यानी। लेबल की, तेज) आम तौर पर लगभग 1.5% से 25% तक होती है। कम लेबलिंग दक्षता के लिए मुख्य कारण मो-99 / टीसी -99 m जनरेटर eluted गया है, जहां साइट से क्लिनिक के लिए 99m टीसी के वितरण में देरी से संबंधित था। अधिक से अधिक 2 घंटे की देरी कोशिकाओं की लेबलिंग में एक बड़ी गिरावट में परिणाम। हालांकि, पर्याप्त आइसोटोप अप करने के लिए 36 घंटे (चित्रा 2) के लिए गामा सिन्टीग्राफी प्रदर्शन करने की कोशिकाओं में शामिल किया है। लेबलिंग दक्षता में सुधार कर सकते हैं कि कारकों में विस्तृत चर्चा कर रहे हैं।

1 या धमनी 12 के माध्यम से (सीधे घाव में) या क्षेत्रीय छिड़काव द्वारा intralesional आरोपण 1 से। चोट कण्डरा के मूल में है और कोशिकाओं के लिए एक गोदाम के रूप में कार्य करता है कि अक्षुण्ण कण्डरा ऊतक से घिरा हुआ जब intralesional आरोपण संभव है। क्षेत्रीय छिड़काव वे एक रक्त वाहिका में इंजेक्शन हैं लेकिन विधि MSCs कण्डरा घाव करने के लिए "घर में" करने में सक्षम हैं कि उम्मीद पर निर्भर करता है के रूप में कोशिकाओं प्रशासन के लिए एक आसान रास्ता है। MSCs लेकिन विशेष रूप से घर कण्डरा घावों की साइटों में कर सकते हैं इस विधि MSCS की घर वापस आना क्षमता में वृद्धि हो सकती है, जो अनुप्रयोगों के विकास के लिए एक उपयोगी प्रयोगात्मक दृष्टिकोण प्रदान करता है कि सीमित सबूत नहीं है।

Intralesional वितरण मार्ग के साथ, कोशिकाओं अपेक्षाकृत समय यानी साथ स्थानीयकृत रहता है, जो संकेत के एक फोकल क्षेत्र के रूप में देखा जाएगा।, सीमित वहाँ हैpread या आसपास कण्डरा ऊतक में कोशिकाओं के प्रवास। कोशिकाओं डिजिटल पलमार नस (चित्रा 2) के माध्यम से क्षेत्रीय छिड़काव द्वारा प्रशासित रहे हैं जब इसके विपरीत, इंजेक्शन स्थल पर समय के साथ संकेत के एक क्रमिक कमी नहीं होगी। फेफड़ों के खेतों नकारात्मक हो, लेकिन बहुत जल्दी समय बिंदुओं पर कुछ मामलों में फेफड़ों अधिक (चित्रा 3) सामान्यीकृत हो जाता है तो फोकल हो सकता है और जो कर सकते हैं आइसोटोप संकेत दिखा सकता है के लिए यह intralesional इंजेक्शन के साथ आम है। थायराइड इस प्रशासन मार्ग के साथ नकारात्मक बनी हुई है। क्षेत्रीय छिड़काव इसी तरह तो अधिक फैलाना हो जाता है लेकिन संकेत intralesional मार्ग के साथ मनाया कि की तुलना में काफी अधिक तीव्र है जो फेफड़ों में फोकल संकेत दिखा सकते हैं। थायराइड अक्सर भी फोकल संकेत दिखा सकते हैं।

कोशिकाओं (0 समय, पूर्व इंजेक्शन) और हित के क्षेत्र में प्रारंभिक गामा scintigram से गिनती की प्रारंभिक कुल रेडियो आइसोटोप गिनती (0 समय, पोस्ट-मैंnjection) का उल्लेख किया और हर समय बिंदु पर मायने में प्रतिशत कमी की गणना करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। यह प्रारंभिक गिनती से टीसी -99 m की भविष्यवाणी क्षय (चित्रा 4) की तुलना करने के लिए प्रयोग किया जाता है। गणना की वक्र भविष्यवाणी की वक्र का पालन करेंगे। हालांकि, खाते में भविष्यवाणी क्षय लेने के बाद, intralesional प्रशासन के बाद इंजेक्शन साइट में शेष कोशिकाओं के हठ (12 घंटे में) के बारे में 32% और (24 घंटे में) 24% (चित्रा 4) है।

आकृति 1
चित्रा 1. सेल लेबलिंग, इंजेक्शन और गामा सिन्टीग्राफी नेतृत्व लाइन परिरक्षण (स्क्रीन और सिरिंज धारक) और विकिरण की निगरानी और microcentrifuge पीछे टीसी -99 m-HMPAO के साथ पहले लेबलिंग करने के लिए एक microfuge में BMMSC (ए) स्थानांतरण। (बी) के एक टिशू कल्चर पकवान शो अच्छा मीटर में वरीयता प्राप्त टीसी -99 m-HMPAO लेबल की कोशिकाओं के एक विभाज्यorphology, व्यवहार्यता और प्रसार; (सी) सही forelimb SDFT की चोट साइट में अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन में टीसी -99 m-HMPAO लेबल की कोशिकाओं के इंजेक्शन; (डी) forelimb के गामा सिन्टीग्राफी। गामा कैमरा ठीक एक maneuverable हाइड्रोलिक भुजा और contralateral अंग में कोशिकाओं को पैरों के बीच आयोजित एक का नेतृत्व ढाल से समाप्त हो जाते हैं लेबल किसी भी संभावित का उपयोग कर तैनात है। गामा कैमरा इसी प्रकार फेफड़ों के क्षेत्र की निगरानी के लिए सीने पर या थायराइड क्षेत्र की निगरानी के लिए गर्दन पर तैनात है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. SDFT का अल्ट्रासाउंड और गामा Scintigrams। (ए में मध्य करभिकास्थिक क्षेत्र में forelimb के ठेठ ultrasonographs (बी) के पार अनुभाग। SDFT में घाव स्पष्ट रूप से करने के लिए और SDFT नीचे आसन्न गहरी डिजिटल flexor कण्डरा (DDFT) की रिहाई (सामान्य) ऊतक अखंडता की तुलना में (स्कैन के ऊपर की ओर) एक hypoechoic क्षेत्र के रूप में देखा जाता है। घाव और tendons के सापेक्ष पदों के क्षेत्र के नीचे योजनाबद्ध में चित्रित कर रहे हैं। गामा scintigraphs डिजिटल पलमार नस के माध्यम से नसों में क्षेत्रीय छिड़काव से घाव या (डी) में इंजेक्शन कोशिकाओं (सी) के लिए दिखाए गए हैं radiolabeled कोशिकाओं के 3, 6 और 12 घंटे के बाद इंजेक्शन में प्रदर्शन किया। दिखाया मामले में, SDFT (ठोस तीर) में घाव साइट में radiolabeled कोशिकाओं के तेज नहीं थी। पाल्मर डिजिटल नस से तेज की हठ धराशायी तीर से चिह्नित है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।


जल्दी समय बिंदुओं से चित्रा फेफड़े और थायराइड की 3. गामा Scintigrams। ठेठ स्कैन intralesional इंजेक्शन और लेबल की कोशिकाओं के क्षेत्रीय छिड़काव दोनों के लिए दिखाए जाते हैं। फेफड़े और थायराइड क्षेत्रों में केन्द्र और फैलाना संकेत ध्यान दें। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
रेडियोधर्मिता की चित्रा 4. क्षय। Intralesional इंजेक्शन के बाद हित के क्षेत्रों से दर्ज इस घोड़े में गिना जाता है घाव में इंजेक्शन के बाद 36 घंटा से अधिक SDFT के गामा scintigrams से मापा गया। वाम पैनल: हर समय बिंदु पर रेडियोधर्मिता समय 0 मूल्य के खिलाफ गणना की गई। फिर99m टीसी की रेडियोधर्मिता में atural क्षय तुलना के लिए दिखाया गया है। राइट पैनल: शेष कोशिकाओं की अनुमानित प्रतिशत। यह ब्याज के क्षेत्रों से रेडियोधर्मिता के स्तर से गणना की है। इस मामले में 24 घंटा पर कोशिकाओं के शेष प्रतिशत के बारे में 24% थी। हम 21 घोड़ों पर (एमएससी और आरोपण की लेबलिंग) इस प्रोटोकॉल प्रदर्शन किया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

अस्थि मज्जा के अलावा, इस तरह के वसा ऊतकों के रूप में स्रोतों से पृथक स्टेम कोशिकाओं को इस प्रोटोकॉल के साथ लेबलिंग के लिए उपयुक्त हैं। इसके अलावा, एक जमे हुए राज्य से कोशिकाओं को पुनर्जीवित किया और लेबलिंग के अध्ययन के लिए 12 वांछित संख्या संस्कृति में विस्तार किया जा सकता है।

BMMSC लेबलिंग की दक्षता को निर्धारित करता है कि एक महत्वपूर्ण कारक radiopharmacy पर मोलिब्डेनम जनरेटर से टीसी -99 m की क्षालन के बीच का समय, टीसी -99 m-HMPAO की तैयारी और क्लिनिक में radiopharmaceutical का इस्तेमाल होता है। इस अवधि से परे देरी काफी सेल लेबलिंग की दक्षता ख़राब कर सकते हैं कि इस तरह के जनरेटर से टीसी -99 m क्षालन के बाद लेबलिंग दक्षता और समय के बीच एक उलटा रिश्ता है। इसलिए, करीब समन्वय प्रयोगशाला से कोशिकाओं के वितरण और कोशिकाओं radiolabeled और प्रत्यारोपित किया जाएगा उस दिन क्लिनिक के लिए टीसी -99 m की डिलीवरी के बीच आवश्यक है। clini के लिए परिवहन समयग इसलिए एक महत्वपूर्ण कारक है। आपूर्तिकर्ता के डाटा शीट टीसी -99 m का क्षय बाद में टीसी -99 m और लिया टीसी -99 m-HMPAO की राशि के लिए HMPAO का बंधन के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं, जो 2 घंटे के बाद क्षालन के बाद radiochemical की पवित्रता को कम कर देता है कि निर्दिष्ट कोशिकाओं द्वारा। हम यह भी एक प्रयोगशाला वातावरण में संवर्धित कोशिकाओं की लेबलिंग क्लिनिक में अधिक से अधिक कुशल लेबलिंग दे दिया है कि उल्लेख किया है। यह भी कोशिकाओं को एक प्रयोगशाला वातावरण में चिह्नित किया गया है, जहां घोड़ों 5 में एक अन्य अध्ययन से की सूचना दी है। इसके अलावा, हमारे अनुभव में, लेबल संस्कृति से तैयार कोशिकाओं की तुलना में रक्त या ऊतक के नमूने से तैयार करने के बाद तुरंत चिह्नित कर रहे हैं कि कोशिकाओं द्वारा और अधिक कुशलता से लिया जाता है। हालांकि, यहां तक ​​लेबलिंग की कम क्षमता के साथ 36 घंटा से अधिक सिन्टीग्राफी प्रदर्शन करने की कोशिकाओं के लिए बाध्य पर्याप्त लेबल नहीं है।

40% की लेबलिंग क्षमता - टीसी -99 m एक से इस्तेमाल किया जाता है, तो 80% ल्यूकोसाइट के लिए प्राप्त किया जा सकता(- 0.5 मिलीग्राम 1) 18 से 30 मिनट और एक छोटी मात्रा में प्रदर्शन प्रतिक्रिया के भीतर ताजा जनरेटर eluate। 47% की लेबलिंग क्षमता - 71% घोड़े का MSCs 19 यह आदर्श परिस्थितियों में MSCS की लेबलिंग दक्षता में वृद्धि संभव है कि प्रदर्शन के लिए हासिल किया गया है।

अप करने के लिए 40 लाख की कोशिकाओं के सबसे बड़े घावों के लिए प्रत्यारोपित किया गया है, हालांकि हम नियमित SDFT कोर घावों के उपचार के लिए 20 लाख की कोशिकाओं के प्रत्यारोपण। इस विधि सामान्यतः क्योंकि अधिक जटिल प्रक्रिया का इस्तेमाल नहीं किया जाता है, हालांकि कोशिकाओं की एक समान संख्या में क्षेत्रीय छिड़काव के माध्यम से प्रत्यारोपित किया जा सकता है। हालांकि, यह घाव में है कि पर्याप्त कोशिकाओं घर उम्मीद के साथ कण्डरा सतह की परिधि के लिए करता हूं जो घावों के लिए उपयोगी हो सकता है। गामा सिन्टीग्राफी द्वारा कोशिकाओं की ट्रैकिंग विभिन्न मार्गों से प्रशासित कोशिकाओं के आंदोलन पर उपयोगी जानकारी प्रदान कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल में, intralesional मार्ग द्वारा प्रत्यारोपित कोशिकाओं mostl हैंY intralesional मार्ग द्वारा इंजेक्शन स्थल पर बनाए रखा। रेडियो आइसोटोप संकेत कुछ मामलों में फेफड़ों के क्षेत्रों में मनाया जा सकता है लेकिन यह कोशिकाओं के छोटे से पलायन दूर घाव साइट से है कि वहाँ सामान्य रूप में प्रकट होता है। क्षेत्रीय छिड़काव द्वारा BMMSC की डिलिवरी चोट साइट पर कोशिकाओं की अवधारण नहीं हो सकता है कि पता चलता है, लेकिन नसों में इंजेक्शन 4 द्वारा दिया जब हम कोशिकाओं के घर वापस आना नहीं मनाया है। टीसी -99 m-HMPAO कोशिकाओं द्वारा भली भाँति और कोशिका द्रव्य में बनाए रखा है के रूप में टीसी -99 m-HMPAO लेबल, कोशिकाओं पलायन की क्षमता 20 को प्रभावित नहीं करता है, यह आसंजन गुण के साथ हस्तक्षेप करने की संभावना नहीं है।

यह (मृत कोशिकाओं या जीवित कोशिकाओं से रिहाई के अन्य तंत्र से जारी) कोशिकाओं से लेबल के महत्वपूर्ण हदबंदी नहीं हो सकता है कि संभव है कि के रूप में ब्याज के क्षेत्रों से संकेत की गणना एक कम हो सकता है। थायराइड मुक्त मृत या मर कोशिकाओं से जारी आइसोटोप (टीसी -99 m), और टीसी-9 कब्जा9 एम-HMPAO गुर्दे और आंत से समाप्त किया जा सकता है। इन ऊतकों लेबल के संभावित नुकसान का आकलन करने के लिए गामा सिन्टीग्राफी द्वारा नजर रखी जा सकती है।

सेल लेबलिंग प्रक्रिया अलग वितरण मार्गों का उपयोग कर विभिन्न साइटों (अंगों और चोट) पर सेल बनाए रखने और तेज के परीक्षण के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। फेफड़ों में संकेत का केन्द्र प्रकृति संभवतः समय के साथ तोड़ या सेल दर्ज है जिसमें सेल समुच्चय का संकेत हो सकता है। मृत कोशिकाओं से इंजेक्शन कोशिकाओं और जिसके परिणामस्वरूप मलबे संचलन के माध्यम से थायराइड के लिए एक और अधिक सुलभ मार्ग है, क्योंकि मुक्त आइसोटोप कब्जा जो थायराइड, संभवतः क्षेत्रीय छिड़काव के बाद तेज में वृद्धि से पता चलता है। कोशिकाओं के बारे में केवल 24% 24 घंटे के बाद रहते हैं, हालांकि ज्यादातर मामलों थायराइड में कुछ भी मुफ्त में टीसी -99 m दिखाया, कण्डरा में intralesional मार्ग सबसे प्रभावी वितरण मार्ग है। इस तरह के प्रोटोकॉल का उपयोग करने से प्राप्त सूचना मो के लिए स्टेम सेल अनुप्रयोगों के भविष्य के डिजाइन और विकास को सूचित कर सकते हैंप्रभावी नैदानिक ​​उपचारों रहे हैं।

सेल लेबलिंग प्रोटोकॉल मानव चिकित्सा अनुप्रयोगों में ल्यूकोसाइट की टीसी -99 m-HMPAO लेबलिंग से घोड़े में उपयोग के लिए अनुकूलित किया गया था। इस प्रोटोकॉल में इसका उपयोग कण्डरा रोग सेल आधारित चिकित्सा की जांच के लिए सहज होता है, जिसमें एक बड़े जानवर में प्रयोज्यता दर्शाता है। नैदानिक ​​मामलों की भर्ती के लिए एक बड़ा जानवर के साथ काम करने के साथ जुड़े उच्च लागत की भरपाई करने में मदद कर सकते हैं। एक इमेजिंग साधन के रूप में उपयोग के लिए लेबलिंग प्रक्रिया छोटे पशु मॉडल 21 में वर्णित किया गया है और हम प्रोटोकॉल इसी तरह इस तरह के अन्य कण्डरा रोगों की जांच के लिए भेड़ के रूप में बड़े जानवरों में उपयोग किया जा सकता है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Technetium99m  Please enquire with local ionisation radiation supplier in accordance with legal requirements.  The isotope must be used within 2 hr of elution from the molybdenum-99 generator
Ceretec - Hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO)  GE HealthCare Please enquire directly with GE HealthCare
Microfuge, Minispin/Minispin Plus Ependorf 22620100
18 G and 19 G Needles Terumo Medical NN-1838R (18 G);         NN1938R (19 G)
Syringes 1 ml and 2 ml Scientific Laboratory Supplies Ltd SYR6200 (1 ml); SYR6003 (2 ml)
Microcentrifuge tubes 1.5 ml Greiner Bio-One Ltd 616201
PBS - Phosphate-Buffered Saline LifeTechnologies 14190
Sterile Gauze Swabs Shermond Ltd UNG602
CoflexVet self adhering bandage Andover Healthcare, Inc. 3540RB-018
Ultrasound imaging software Scion Image, Scion Corporation, USA
MicasXplus Scintigram processing software Bartec Technologies Ltd http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html
Field isotope counter for monitoring isotope John Caunt U.K. GMS1800a http://www.johncaunt.com/
Well counter for isotope measurements, dose calibrator Capintec Southern Scientific CRC-25R

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References

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चिकित्सा अंक 106 पट्टा tendinopathy घोड़े mesenchymal स्टेम सेल सेल ट्रैकिंग टेक्नीशियम
घोड़े tendinopathy में अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम सेल लेबल टेक्नेटियम -99 m <em>के</em> vivo इमेजिंग और ट्रैकिंग <em>में</em>
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Dudhia, J., Becerra, P., Valdés, M. A., Neves, F., Hartman, N. G., Smith, R. K. W. In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy. J. Vis. Exp. (106), e52748, doi:10.3791/52748 (2015).

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