Summary
Este artigo demonstra a técnica de expansão de uma esteira de nanofibras tradicional, duas dimensões (2D) electrospun em um andaime de três dimensões (3D) através da despressurização subcrítico CO2 líquido. Estes andaimes aumentadas são 3D, pistas perto imitar nanotopographic celular e preservar as funções de moléculas biológicas encapsuladas dentro de nanofibras.
Abstract
Eletrofiação tem sido a tecnologia preferencial em produzir um andaime devido o biomimetismo a matriz extracelular e o controle de facilidade de composição, estrutura e diâmetro de fibras sintético, funcional. No entanto, apesar dessas vantagens, electrospun tradicional nanofibras andaimes vêm com limitações incluindo desorganizado orientação de nanofibras, baixa porosidade, tamanho dos poros pequenos e esteiras principalmente bidimensionais. Como tal, há uma grande necessidade para o desenvolvimento de um novo processo para fabricar andaimes de nanofibras de electrospun que podem superar as limitações acima. Neste documento, um método simples e romance é descrito. Uma esteira de nanofibras 2D tradicional é transformada em um andaime 3D com a espessura desejada, distância, porosidade e pistas de nanotopographic para permitir a propagação de células e proliferação através da despressurização subcrítico CO2 líquido. Além de fornecer um andaime para regeneração de tecidos ocorrer, esse método também fornece a oportunidade para encapsular moléculas bioativas, tais como peptídeos antimicrobianos para entrega de drogas local. Os CO2 expandida nanofibras andaimes segurar grande potencial na regeneração de tecidos, cicatrização de feridas, tecido 3D modelagem e entrega de droga tópica.
Introduction
O conceito de desenvolvimento de um andaime sintético que pode ser implantado em pacientes para auxiliar na regeneração e reparo tecidual é aquele que tem permeado o campo da medicina regenerativa para décadas. O andaime sintético ideal serve para induzir a migração de células do tecido saudável circundante, fornece uma arquitetura para vascularização de suportes de semeadura, adesão, sinalização, proliferação e diferenciação, célula, permite a adequada oxigenação e entrega de nutrição e promove a atividade imunológica do hospedeiro para garantir o sucesso após a implantação1. Além disso, ele pode ser usado como um portador para a incorporação de moléculas antimicrobianas para auxiliar na ferida cura1,3,6,7,8,9. A capacidade de controlar o lançamento temporal destas moléculas biológicas do cadafalso sintético é outro atributo desejável que é considerado quando engenharia moldes1.
Eletrofiação tem sido uma técnica bem-utilizada para a produção de nanofibras andaimes1,2,3,4,5,6. Tentativas anteriores para criar um andaime de nanofibras como o discutido aqui tem sido feitas em diferentes graus de sucesso. No entanto, nanofibras tradicionais andaimes limitaram habilidades para atingir esses objetivos. Andaimes de nanofibras tradicionais têm sido principalmente esteiras bidimensional1,3. Estes andaimes nonexpanded são densamente com tamanhos de poros pequenos; Isso limita a infiltração celular, migração e diferenciação como ele não promove um ambiente bastante semelhante àquelas encontradas na vivo1,7,8,9. Por esta razão, novas técnicas de preparação de andaime de nanofibras electrospun 3D foram criadas para alterar as falhas inerentes que vêm com esteiras de nanofibras 2D. Estas técnicas resultam em 3D andaimes; no entanto, eles têm limitada aplicabilidade devido aos métodos de produção que exigem soluções aquosas e procedimentos de liofilização. Esse processamento resulta na distribuição aleatória das nanofibras sem organização restrita, espessura adequada, e/ou porosidade desejada para fornecer as pistas de nanotopographic adequados que são necessárias para a proliferação e migração celular. Esses fatores resultam nos andaimes de nanofibras 3D electrospun anterior que a falta de adequada mimetismo de vida tecidos1,7,8,9.
Mais recentes tentativas de desenvolver um andaime expandido, 3D com melhor biomimetismo da matriz extracelular (ECM) foram realizadas usando um tratamento da solução (NaBH4) boro-hidreto de sódio aquoso e moldes pré-concebidos para ajudar a controlar melhor o forma da resultante andaime7,8. No entanto, esse método não é o ideal, como exige o uso de soluções aquosas, reações químicas e de liofilização que pode interferir com polímeros e qualquer biomoléculas encapsuladas que são solúveis em água. Os aditivos usados também podem causar efeitos colaterais durante a regeneração de tecido8,9. O método de expansão de2 CO descrito neste artigo grandemente reduz o tempo de processamento, elimina a necessidade de soluções aquosas e preserva a montante e a funcionalidade de moléculas biologicamente ativas em maior medida do que o anteriormente estabelecidos métodos9.
Em estudos anteriores, antibióticos, prata, 1 α, 25 dihidroxivitamina D3e peptídeo antimicrobiano LL-37 foram carregados os andaimes de nanofibras individualmente e em conjunto para investigar o potencial destes andaimes para liberar agentes para mais ajuda na ferida cura9,10,12,13. Com a finalidade de demonstrar este método de expansão de andaime de nanofibras, Coumarine 6, um corante fluorescente, serão carregados no cadafalso para demonstrar o potencial de incorporação o andaime com vários compostos desejados. Este método de fabricação de andaime de nanofibras expandido em conjunto com moléculas bioativas encapsulados possui grande potencial na regeneração dos tecidos, cicatrização de feridas, a criação de modelos 3D de tecido e a entrega tópica de drogas.
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Protocol
Todos na vivo os procedimentos descritos abaixo foram aprovados pelo Comité IACUC no centro médico da Universidade de Nebraska.
1. prepare as soluções para o padrão eletrofiação
- Em um tubo de vidro de 20 mL, dissolver 2 g de poly(ε-caprolactone) (PCL, Mw = 80 kDa) em uma solvente mistura de diclorometano (DCM) e N, N-dimetilformamida (DMF) com uma ração de 4:1 (v/v) em uma concentração de 10% (p/v).
Cuidado: Punho DCM e DMF em um capuz ventilado para evitar a exposição aos vapores. Não exponha o DCM para materiais plásticos. - Coloque o tubo de vidro em um rotador de laboratório até a solução torna-se claro. A solução pode misturar durante a noite.
- Se pretende incorporar materiais bioativos como peptídeos ou drogas para o cadafalso, criar uma solução separada e armazenar à 4 ° C até que esteja pronto para usar.
- Prepare a solução de tintura fluorescente (50 mg/mL) com 20 mL de solução PCL.
2. montar o aparelho eletrofiação (figura 1A)
- Adicione a solução PCL para uma seringa de 20 mL com uma agulha 21 calibre anexada. Certifique-se de que não existe ar na seringa e tubagem associada.
- Coloque um tambor de aço rotativo com o coletor de solo 12 cm da ponta da agulha.
- Usando clipes jacaré, conecte a fonte de alimentação de alta tensão de corrente contínua (DC) para a agulha e certifique-se de que o coletor é castigo.
Cuidado: Sempre desligue a alimentação antes de manusear qualquer materiais ligados.
3. eletrofiação
- Para os 20 mL de solução PCL, defina os parâmetros da bomba de seringa como segue: diâmetro = 20,27 mm, taxa de fluxo = 0,5 mL/h. verificar se as gotas estão se formando na ponta da agulha.
- Se a incorporação de moléculas bioativas é desejada, configurar o aparelho para permitir a eletrofiação co-axial (figura 1B). Crie um personalizado bocal coaxial usando agulhas hipodérmicas.
Nota: Esses bicos estão também disponíveis comercialmente. Note que é preparada uma solução de corante para simular a adição de tais moléculas.- Prepare uma solução de 1% do corante fluorescente 6 de cumarina em água. Adicione 3 mL de corante 1% a uma pequena seringa. Conecte a seringa de bico coaxial mesmo como a solução PCL. Mais uma vez, certifique-se de que não há nenhuma bolha de ar.
- Para esta solução de 3 mL, defina os parâmetros da bomba de seringa como segue: diâmetro = 9,49 mm, taxa de fluxo = 0,02 mL/h. verificar se as gotas estão se formando na ponta da agulha.
- Aplicar um potencial elétrico de 20 kV entre a fieira (agulha de calibre 22) e um coletor de solo situado a 20 cm de distância da fieira. Recolha as esteiras de nanofibras alinhados em um tambor rotativo a 2.000 rpm. Recolha as esteiras de nanofibras PCL quando atingem uma espessura de ~ 1 mm.
4. geração de nanofibras PCL esteiras com buracos de matriz.
- Fabrica tapetes de nanofibras PCL.
- Dissolva os grânulos PCL numa mistura solvente consistindo de DCM e DMF com uma relação de 4:1(v/v) com uma concentração de 10% (PCL) (p/v). Bombear a solução PCL com um caudal de 0,7 mL/h, usando uma bomba de seringa, enquanto um potencial de 20 kV é aplicada entre a fieira (uma agulha de calibre-22) e um coletor aterrado localizado além da fieira de 12 cm.
- Recolha a membrana de nanofibras usando um tambor rotativo com uma velocidade de giro maior do que 500 rpm.
- Mergulhe as esteiras de nanofibras PCL no líquido N2 por 5 min (i. e., tornar-se duro). Manter as esteiras de nanofibras PCL no líquido N2 e socar PCL nanofibras esteiras um golpe de 0,5 mm de diâmetro.
5. expansão de nanofibras 2D esteiras com/sem furos matriz através de subcrítica CO2 líquido (Figura 2).
- Coloque as esteiras de nanofibras PCL em nitrogênio líquido por 5 min e corte em quadrados de 1 cm x 1 cm, usando tesouras cirúrgicas afiadas enquanto submerso em nitrogênio líquido para evitar a deformação das bordas.
- Coloque o tapete de corte em um tubo de centrífuga de 30ml com ~ 1 g de gelo seco. Firmemente a tampa do tampão e permitir o gelo seco transformar em líquido de CO2.
- Uma vez que o líquido se formou no tubo, libera-se rapidamente a pressão, abrindo a tampa.
Atenção: Use equipamento de proteção térmico adequado ao trabalhar com nitrogênio líquido e gelo seco. Não abra o tubo pressurizado para o rosto. Tubo de centrífuga não deve ser usado repetidamente. - Retirar e observar o andaime inchado do tubo. Coloque o andaime em um novo tubo de centrifugação com gelo seco e repita até a espessura desejada seja alcançada. Esterilize os andaimes de nanofibras expandido em óxido de etileno antes da incubação com células.
6. caracterização de nanofibras expandido andaimes
- Caracteriza a morfologia e a estrutura dos andaimes de nanofibras expandida usando microscopia eletrônica de varredura (MEV).
- Colocar as amostras com fita condutiva dupla face à viga metálica e casaco com platina para 40 s usando um aplicador por pulverização catódica em 40 mA.
- Examine as fibras usando SEM segundo anteriores estudos9. Recolher as imagens em uma tensão de aceleração de 15 kV.
- Caracteriza em vitro perfis de liberação e bioatividade de peptídeos liberados.
- Peso 10 mg de nanofibras membranas antes e após a expansão em CO2.
- Mergulhe as amostras em tampão PBS e coletar 10 μL do sobrenadante a pontos de tempo diferentes (0-28 dias).
- Use o kit de Enzyme-Linked imuno Sorbent ensaio (ELISA) para quantificar a concentração de peptídeo de LL-37 no sobrenadante coletado.
- Examine a resposta de infiltração celular in vivo e anfitrião.
- Coloque os ratos Sprague-Dawley (SD) 9 - semana de idade em uma câmara de anestesia, conectar-se ao vapor de isoflurano e anestesiar os ratos. Transferi os ratos para uma mesa de operação depois que os ratos se tornam anestesia completa sem sentimentos. Continuamente anestesia os ratos usando um cone de nariz de isoflurano com vaporizador durante a cirurgia. Raspar o cabelo das costas do rato pela máquina de barbear do animal e sterilize com iodo e álcool esfoliação da pele. Crie bolsos subcutâneos através de incisões de 1,5 cm no supra-espinhais sites no dorso com um bisturi.
- Insira a bolsa subcutânea usando uma pinça para cada incisão um andaime de nanofibras expandida (1,5 mm de espessura). Feche a incisão usando um grampeador.
- Em 1, 2 e 4 semanas, eutanásia em ratos com 95% de CO2. Delicadamente, disse o explante e do tecido circundante com uma tesoura cirúrgica. Antes da análise histológica, mergulhe o tecido em formol pelo menos 3 dias e depois incorporar com parafina. Seção do tecido com um micrótomo e, em seguida, executar a hematoxilina e eosina (H & E), de coloração tricromo de Masson.
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Representative Results
A eficácia da expansão electrospun 2D tradicional nanofibras esteiras em andaimes 3D através de despressurização subcrítico CO2 líquido foi demonstrada em diferentes capacidades: a espessura dos andaimes aumentou de 1 mm, quando não tratada a 2,5 mm e 19,2 mm com CO2 tratamentos 1 e 2, respectivamente (Figura 3A-C). A porosidade-a característica da arquitetura crítica para a propagação de célula-também aumentou de forma correspondente à maior espessura (Figura 3). A porosidade dos andaimes aumentada de 79,5% para as esteiras não tratadas para 92,1 e 99,0% após os tratamentos de primeiros e segundo, respectivamente (Figura 3D). Isto é significativo porque o grau de penetração da célula em um andaime e, portanto, sua eficácia para induzir a regeneração é largamente dependente da porosidade1.
SEM imagens revelaram que a estrutura densamente, fibrillar de esteiras 2D não tratadas foram transformadas em estruturas ordenadas, em camadas com nanofibras alinhadas após expansão com CO2 (Figura 3E-H). Estudos anteriores concluíram que da mesma forma em camadas de estruturas com fibras organizadas podem ser fundamentais para a preservação da nanotopographic sugestões para a regeneração dos tecidos como tendão, músculo e nervo7,8. No entanto, estes estudos examinaram os andaimes expandidos com NaBH47,8. Este método requer mais processamento tempo e solventes que podem lixiviar moléculas bioativas do andaime7,8. NaBH4, um forte agente redutor, pode reagir com moléculas bioativas encapsuladas. Por outro lado, a utilização de fluido de CO2 subcrítico para expansão foi mostrada para preservar a bioatividade das moléculas adicionais previamente semeado para o cadafalso, quando comparado com andaimes expandidos usando o método de4 NaBH (Figura 4). Isto foi demonstrado usando tintura de cumarina 6; a cor verde do corante foi mantida melhor nos andaimes expandidos com CO2 (Figura 4), indicando que o uso de subcrítica CO2 líquido para resultados de expansão em melhor retenção da integridade de moléculas encapsulados em andaimes o PCL.
A cinética de liberação do peptide antimicrobial LL-37 dos andaimes antes e após a expansão foram medidos em vitrovia um kit de ELISA de acordo com as instruções do fabricante (Figura 5A). A eficácia antimicrobiana de LL-37 andaimes de nanofibras peptídeo carregado antes e após a expansão com CO2 foi avaliada através da incubação com Pseudomonas aeruginosa (p. aeruginosa). O número de colônias de vida pós incubação com os andaimes foi quantificada. Os resultados mostraram que a atividade antimicrobiana do CO2-andaimes expandidas, LL-37-carregado era semelhante ao que de andaimes de LL-37-carregado não expandidos, indicando que o processo de expansão pode preservar a bioatividade de encapsulados LL-37 peptídeos (Figura 5B).
Na vivo seus estudos foram realizados pela implantação subcutânea de CO2-expandido nanofibras andaimes com furos quadrados-se vestiu de ratos. Isto permite a migração celular e proliferação dentro dos buracos, bem como mais infiltração dentro das camadas de nanofibras que foram criados durante a expansão (Figura 6). O andaime expandido mostrou um aumento significativo no número de vasos sanguíneos formados (Figura 6, E) e células gigantes multinucleadas (Figura 6, F) da semana 1 a 4 após a implantação. Reagidos mais resultados de coloração indicaram uma diminuição do número de C-C chemokine receptor tipo 7 (CCR7) - positivo infiltrado de macrófagos e um aumento do número de Cluster de diferenciação 206 (CD206) - positivo infiltrado de macrófagos da semana 1 a semana 4 após o implante.
Figura 1: configuração típica eletrofiação. Um aparelho típico eletrofiação coaxial é mostrado. Eletrofiação requer três componentes principais: uma fonte de alimentação de alta tensão, uma fieira e um coletor eletricamente condutor. Fiação coaxial usa dois líquidos para girar um andaime de nanofibras; Isto permite o encapsulamento de outras moléculas. Assemblies e nanofibras alinhamento podem ser aumentados através do coletor, variando as velocidades de rotação do tambor rotativo. Neste protocolo, um bocal personalizado foi criado usando duas agulhas hipodérmicas. Bicos semelhantes estão disponíveis comercialmente. Esta figura foi adaptada da Xie, et al14. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: Etapas da expansão de andaime usando subcrítico CO2 líquido. (A) Use um recipiente é selável e pode suportar a pressão, como um tubo de centrífuga plástico 30 mL. (B) adicione um pedaço de 1 x 1 cm de esteira de nanofibras 2D PCL. (C) adicione ~ 1 g de gelo seco. (D) sele o recipiente. (E) permitir que a pressão construir no tubo. Isto vai virar o sólido CO2 líquido de CO2. Quando o líquido se juntou, libera-se rapidamente a vedação do tubo. Isso fará com que o líquido de CO2 para rapidamente tornar-se gasoso CO2, resultando em CO2 permeando a esteira de nanofibras 2D. (F) Observe o andaime 3D. Estas etapas podem ser repetidas até a espessura desejada seja alcançada. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Visualização de 2D esteiras antes e após a expansão de CO2 líquido subcrítico. (A) fotografia mostra tapetes de nanofibras PCL antes do tratamento de subcrítica CO2 líquido (à direita) e após o primeiro tratamento (à esquerda). (B) fotografia mostra esteira de nanofibras PCL antes do primeiro tratamento com CO2 líquido subcrítico (à direita) e depois do segundo tratamento (à esquerda). (C) o gráfico mostra as espessuras de tapetes de fibra PCL antes e depois de um ou dois tratamentos com subcrítico CO2 líquido. (D) o gráfico mostra a porosidade relativa de tapetes de fibra PCL antes e depois de um ou dois tratamentos com subcrítico CO2 líquido. (E-H) Imagem mostra transversal aparência de esteiras PCL capturados por meio de SEM. (E-F) SEM imagem de tapetes de fibra PCL antes do tratamento. (G-H) Imagem SEM de tapetes de fibra PCL após dois tratamentos com subcrítico CO2 líquido. Esta figura foi adaptada de Jiang, et al9. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: Cumarina 6 corante-carregado PCL nanofibras esteiras antes e após a expansão com subcrítico CO2 líquido e solução aquosa de NaBH4 . (A) imagens grosseiramente mostram a quantidade de corante Coumarine 6 restantes em andaimes PCL, seguindo a expansão com CO2 (à direita) e NaBH4 (à esquerda). (B) imagens mostram vistas top brutas de PCL andaimes e sua fluorescência correspondente na seguinte ordem: andaime Raw (inferior direito), esteira 2D carregado com 6 Coumarine corante (superior direito), andaime PCL carregado com 6 Coumarine corante expandido com CO2 ( superior esquerda), NaBH4 (inferior esquerdo). (C) o gráfico mostra a intensidade de fluorescência da cumarina 6 corante após PCL esteiras foram tratadas, expandiu-se através de subcrítica CO2 líquido e expandiu-se através de NaBH4 tratamentos. Fluorescência foi quantificada pelo software Image J. Esta figura foi adaptada de Jiang, et al9. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5: moléculas bioativas encapsuladas em andaimes PCL. (A) gráfico retrata o lançamento relativo do peptídeo antimicrobiano LL-37 em membranas 2D e subcrítica CO2 líquido expandido andaimes 3D (B) gráficos retratam a eficácia antimicrobiana de esteiras de nanofibras PCL diferentes quando expostos a P . aeruginosa. Esta figura foi adaptada de Jiang, et al9. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6: No vivo respostas de andaimes de nanofibras PCL com e sem expansão através de subcrítica CO2 em sites de dorso subcutâneo de ratos. (A) coloração H & E. Pontos verdes designar limites de infiltração celular. (B) tricromo de Masson. Setas verdes designar a deposição de colágeno. (C) altamente ampliada a imagem de coloração H & E. Setas verdes designar os vasos sanguíneos. (D) altamente ampliada imagens de coloração H & E. Setas verdes designar células gigantes. (E) gráfico retrata o crescimento de vasos sanguíneos por mm2. (F) gráfico quantifica o número de células gigantes que se infiltrar em esteiras PCL 2D tradicionais comparadas com esteiras PCL expandidas com subcrítico CO2. Esta figura foi adaptada de Jiang, et al9. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Transformando electrospun 2D tradicionais esteiras de nanofibras expandidos andaimes 3D através de CO2 despressurização foi investigada. Esteiras de nanofibras 2D tradicional são expandido com sucesso através de subcrítica CO2 líquido. Os passos críticos são para fabricar esteiras de nanofibras 2D sob uma condição otimizada e cortar as esteiras sem deformar as bordas (EG., utilizando tesouras cirúrgicas em ponto). Esta CO2-andaimes de nanofibras expandida têm muitos benefícios sobre esteiras 2D tradicionais, incluindo estruturas em camadas (Figura 3A-B), menos embalagem densidade (Figura 3D-H) e maior porosidade (Figura 3D). Este método de expansão também é vantajoso em relação os métodos existentes de expansão em que é mais rápido processar e reduz a perda total de encapsulado ativas moléculas biológicas devido à exclusão desta técnica de soluções aquosas e liofilização procedimentos8,9. No entanto, a limitação dessa técnica é que a morfologia de nanofibras poliméricas não deve ser deformada/dissolvidos no fluido subcrítico CO2 . Por exemplo, esteiras de nanofibras PLGA (50: 50) não podem ser expandidas usando esta técnica. Essas esteiras de nanofibras poderiam ser expandidas usando outros líquidos de gás.
Nossos estudos anteriores demonstraram que células semearam de maneira mais uniforme dentro de andaimes de nanofibras expandida quando comparado com8esteiras 2D. Neste trabalho, uma taxa significativamente maior de formação de vasos sanguíneos ocorreu (Figura 6, E), e hospedeiro imune celular infiltrados foram observados dentro de CO2-expandido nanofibras andaimes com furos quadrado-dispostos a seguir implantação subcutânea em ratos (Figura 6, F). Angiogênese e infiltração de células imunes indicam que o andaime é engajar-se com o tecido do hospedeiro e possivelmente homing células necessárias para a regeneração do tecido danificado; Isto implica uma maior taxa de pós-implantação de sucesso para o anfitrião9.
O CO2-andaimes expandidas também têm o potencial para ser incorporado com uma variedade de peptídeos e outras moléculas que podem auxiliar na obtenção da resposta desejada. Aqui, o efeito desejado é para ser um andaime para regeneração de tecidos, proporcionando simultaneamente atividade antimicrobiana através do peptide de LL-37 incorporado. Os andaimes expandidos com subcrítico CO2 líquido também mostraram melhor retenção das moléculas incorporadas quando comparado com andaimes expandidos com NaBH4. As moléculas de corante encapsuladas dentro os andaimes PCL foram melhores retidos (Figura 4). Além disso, uma proporção ligeiramente maior do peptide antimicrobial LL-37 encapsulado foi libertado o 3D CO2 expandiu andaimes quando comparado com esteiras 2D (Figura 5A). A bioatividade de LL-37 foi mantida como os CO2 expandida andaimes mostrou uma eficácia antimicrobiana semelhante quando comparado com os andaimes 2D (Figura 5B).
Este novo método de expansão 3D que significa a produção de andaime sintético não está limitado ao uso de esteiras de nanofibras 2D. Os dados apresentados sugerem que este método de expansão é melhor manter a quantidade e a bioatividade de materiais bioativos encapsulados dentro de andaimes de nanofibras expandida. Simultaneamente, os andaimes de nanofibras expandido imitam os ambientes nanotopographic daqueles encontrados na vivo9, um atributo que muito auxilia na indução de regeneração do tecido1. No futuro, estes CO2-andaimes expandidas podem ter aplicações potenciais na assistência de ferida cura e tecido regeneração, bem como na criação do modelo 3D do tecido e entrega de droga controlada localmente.
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Disclosures
Os autores declaram que não há nenhum conflito de interesses.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado por concede do Instituto Nacional de General Medical ciência (NIGMS) no NIH (2P 20 GM103480-06 e 1R01GM123081 para J.X.), os fundos de Otis Glebe Medical Research Foundation, NE LB606 e inicialização de medicina da Universidade de Nebraska Centro.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polycaprolactone | Sigma-Aldrich | 440744 | |
| N,N-Dimethlyformamide | Fisher Chemical | D-199-1 | |
| Dichloromethane | Fisher Chemical | AC61093-1000 | |
| Coumarin 6 | Sigma-Aldrich | 546283 | |
| Rotating Steel Drum | customized | This serves as a collector during electrospinning. | |
| Syringe Pump | Fisher Scientific | 14-831-200 | Coaxial spinning requires two single syringe pumps. |
| Revolver | Lab Net International | H5600 | Adjustable lab rotator for mixing solutions |
| Hypodermic Needle (27G x 1 1/2") | EXCELINT International Co | 26426 | This is part of the example customized coaxial nozzel shown. |
| Hypodermic Needle (21G x 1 1/2") | EXCELINT International Co | 26416 | This is part of the example customized coaxial nozzel shown. |
| High Voltage DC Power Supply | Gamma High Voltage Research | ES30 | |
| Scanning Electron Microscope | FEI | Nova 2300 | |
| Fluorescence Microscope | Zeiss | Axio Imager 2 | |
| LL 37 ELISA Kit | Hycult Biotech | HK321-02 |
References
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