Gibberella zeae produção de ascósporos e Coleta de Experimentos de Microarray.
Summary
Para estudar os processos de desenvolvimento de ascósporos em Gibberella zeae, um procedimento de coleta em condições estéreis é filmado de forma a gerar o maior nível de informação para a descrição do protocolo. Isso deve facilitar a reprodutibilidade do experimento, um aspecto crucial quando completa do genoma testes perfil de expressão são implementadas.
Abstract
Fusarium graminearum Schwabe (teleomorfo Gibberella zeae) é um patógeno de plantas que causam a doença em crosta de trigo e cevada, que reduz rendimento da colheita e qualidade de grãos. F. graminearum também provoca caule e ouvido rots de milho e é um produtor de micotoxinas, como a tricotecenos que contaminam grãos e são prejudiciais para seres humanos e animais (Goswami e Kistler, 2004). O fungo produz dois tipos de esporos. Ascósporos, os propágulos resultante da reprodução sexual, são a principal fonte de infecção primária. Esses esporos são forçosamente alta peritécios maduros e dispersos pelo vento (Francl et al 1999). Infecções secundárias são causadas principalmente por macroconídios que são produzidos por meio assexuada na superfície da planta. Para estudar os processos de desenvolvimento de ascósporos no este fungo, um procedimento para a sua coleção em grande quantidade em condições de esterilidade era necessário. Nosso protocolo foi filmado a fim de gerar o maior nível de informação para a compreensão e reprodutibilidade; aspectos cruciais quando completa do genoma perfis de expressão gênica são geradas e interpretadas. Em particular, a variabilidade de germinação ascósporos e atividade biológica são dependentes da manipulação prévia do material. O uso de vídeo para documentar cada passo na produção de ascósporos é proposto, a fim de aumentar a padronização, cumprindo com as exigências cada vez mais rigorosas para a análise de microarray. O procedimento requer apenas equipamentos de laboratório padrão. Etapas são mostradas para evitar a contaminação e sincronização favor época de ascósporos.
Protocol
Discussion
O protocolo apresentado aqui é baseado em procedimentos anteriores utilizados para a produção perithecial para Fusarium spp. (Klittich e Leslie, 1988; Trail e Common, 2000). Padronização do procedimento pelo qual uma grande quantidade de ascósporos (suficiente para a análise de microarray) foram gerados foi essencial para a reprodutibilidade do experimento. Tem sido relatado que as diferenças fatores ambientais, idade e substrato pode mudar o caráter biológico de ascósporos (Beyer e Verreet, 2005). Portanto, o uso do vídeo pode …
Acknowledgements
Os autores agradecem a Karen Hilburn para excelente suporte técnico. Este projecto foi apoiado pela Iniciativa Nacional de Pesquisa do Estado Cooperative Research USDA, Educação e Serviço de Extensão (Award # 2004-35604-14327). Matias Pasquali é apoiada por Branco Weiss Fellowship. O trigo dos EUA e Iniciativa Scab Cevada também é reconhecido pelo apoio permanente de pesquisa.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri dish 9 cm Diameter | Tool | |||
| Tween 60 (20%) | Reagent | |||
| Carrot agar (20% w/v organic carrots and 1.5% w/v agar) | Reagent |
References
- Beyer, M., Verreet, J. A., Francl, L., Shaner, G., Bergstrom, G., Gilbert, J., Pedersen, W., Dill-Macky, R., Sweets, L., Corwin, B., Jin, Y., Gallenberg, D., Wiersma, J., Goswami, R. S., Kistler, H. C., Klittich, C. J. R., Leslie, J. F., Trail, F., Common, R., Tschantz, A. T., Horst, R. L., Nelson, P. E., Tschanz, A. T., Horst, R. K., Nelson, P. E. Germination of Gibberella zeae ascospores as affected by age of spores after discharge and environmental factors. 遗传学. 118, 417-2013 (2005).
