We beschrijven de fijne ontleding van het stomatogastric zenuwstelsel uit de maag van de Amerikaanse kreeft (<i> Homarus americanus</i>).
Met het doel om te begrijpen hoe zenuwstelsel activiteit te produceren en te reageren op het milieu, neurowetenschappers wenden tot model systemen die de activiteit van belang vertonen en zijn toegankelijk en vatbaar voor experimentele methoden. Het stomatogastric zenuwstelsel (STNS) van de Amerikaanse kreeft (<i> Homarus americanus</i>; Weten ook was de Atlantische Oceaan of Maine kreeft) is opgericht als een modelsysteem voor de bestudering van het ritme het genereren van netwerken en neuromodulatie van netwerken. De STNS bestaat uit 3 anterior ganglia (2 commissural ganglia en een slokdarm ganglion), met modulerende neuronen die centraal project om de stomatogastric ganglion (STG). De STG bevat ongeveer 30 neuronen die twee centrale patroon genereren netwerken omvatten, de pylorus en het maag-netwerken dat het voeren van gedragingen in schaaldieren ten grondslag liggen aan<sup> 1,2</sup>. Hoewel het mogelijk is om te studeren dit systeem<i> In vivo</i<sup> 3</sup>, De STNS blijft zijn ritmische activiteit produceren wanneer geïsoleerd<i> In vitro</i>. Fysieke isolatie van de STNS in een schotel zorgt voor gemakkelijke toegang tot de somata in de ganglia voor intracellulaire elektrofysiologische opnames en om de zenuwen van de STNS voor de extracellulaire opnames. Het isoleren van de STNS is een tweedelig proces. Het eerste deel, het ontleden van de maag van het dier, is beschreven in een begeleidend artikel van video-<sup> 4</sup>. In deze video artikel, zijn prima dissectie technieken die worden gebruikt om de STNS van de maag te isoleren. Deze procedure resulteert in een zenuwstelsel preparaat dat beschikbaar is voor elektrofysiologische opnames.
De anatomie van kreeft maag en STNS is goed eerder 5,6 beschreven, en variaties van deze dissectie procedure zijn gebruikt in talloze studies. We raden aan bekend te raken met de anatomie van de maag 5-7 en STNS 5,8 voor het begin van dissecties. Een dergelijke bekendheid zal verminderen het risico op accidentele schade aan de zenuwen en weefsel.
Voor een duurzaam behoud van de gezondheid van de voorbereiding, is het essentieel om de voorbereiding te handhaven op een koele temperatuur. Dit is eenvoudig te bereiken door het uitwisselen van de zoute elke 30 minuten met 4 ˚ C zoutoplossing bewaard in een koelkast. Bij onderdompeling in koude zoutoplossing, de geïsoleerde STNS voorbereiding is haalbaar voor vele uren. Opnamen in verwante Homarus gammarus hebben aangetoond een stabiele ritmische activiteit van de STG heel 5 dagen in vitro 9, lijkt robuustheid werd gezien in H. americanus (pers. obs.).
Modulerende input voor de STG van de commissural ganglia nodig is om de lopende motor patronen te behouden. Daarom, om een normale ritmische activiteit van deze ganglia en het ion, de zoon te onderhouden en STN zenuwen moeten intact blijven. De dissectie beschrijven we behouden een aantal motorische zenuwen (met motor neuron axons): de AGN s (met daarin Gastric Mill (GM) axonen), de mvn s (met daarin Laterale Gastric (LG) en Inferior Cardiac (IC) axonen), de pyn s (met pylorus neuron (PY) axonen), de PDN s (met pylorus Dilator (PD) axonen), en de lvn s (met daarin Laterale pylorus (LP), mediale maag (MG), LPG axonen evenals die van GM, PD en PY). Door het ontleden van extra (of andere) zenuwen, kunnen andere motor neuron axonen worden opgenomen. Elke individuele type motor neuron axon kunnen individueel worden geregistreerd door het ontleden en opnemen van de zenuw innerveren de spier waarop die soort van neuron projecten.
Dit preparaat kan worden gebruikt voor een verscheidenheid van studies gericht op het functioneren van het zenuwstelsel. De activiteit van de neuronen kan worden opgenomen hetzij met behulp van de intracellulaire, scherpe elektrode opnames van somata of axonen, of door het opnemen van elektrische impulsen extracellulair van de zenuwen. Veel ion kanalen in de STG neuronen zijn deels gekloond en mRNA kan gemeten worden vanuit de hand getrokken somata 10,11.
We willen graag onze adviseur, dr. Eva Marder erkennen. Dit onderzoek werd ondersteund door het National Institute of Health beurzen NS17813 tot Eva Marder en NS059255 naar AE T.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Tool | California Fine Wire | Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins. | |
Forceps #5 | Tool | FST | 91150-20 | |
Minuten Pins | Tool | FST | 26002-10 | |
Moria Spring Scissors (7mm blades) | Tool | FST | 15370-52 | These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company. |
Petri Dish (100x15mm) | Tool | Fischer | 08-757-12 | Fill 2-4mm with Sylgard 182. |
Sylgard 182 | 其他 | Dow Corning | 182 | |
Pin Holder | Tool | FST | 26018-17 | Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone. |
Super fine forceps #5SF | Tool | FST | 11252-00 | |
Tungsten Needles | Tool | FST | 10130-05 | Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire. |
Dissection microscope |