Isolatie en dierlijk serum vrije expansie van de mens navelstreng Afgeleid Mesenchymale stromale cellen (MSC's) en Endotheliale Colony Forming progenitor cellen (ECFCs)
Summary
Dit protocol beschrijft de isolatie en de daaropvolgende expansie van mesenchymale stromale cellen en endotheelcellen kolonievormende cellen zonder het gebruik van dierlijke serum op autologe paren te genereren voor experimentele transplantatie doeleinden.
Abstract
De navelstreng is een rijke bron voor progenitor cellen met een hoog potentieel, met inbegrip proliferatieve mesenchymale stromale cellen (ook wel mesenchymale stamcellen, MSC's) en endotheliale kolonievormende progenitor cellen (ECFCs). Beide celtypen zijn belangrijke spelers in het handhaven van de integriteit van de weefsels en zijn waarschijnlijk ook betrokken bij regeneratieve processen en tumorvorming.
Het bestuderen van hun biologie en functie in een vergelijkend onderzoek is het belangrijk om beide cellen types beschikbaar van dezelfde donor. Het kan ook nuttig zijn voor regeneratieve doeleinden te leiden MSC's en ECFCs uit hetzelfde weefsel.
Omdat de cellulaire therapieën moeten uiteindelijk hun weg vinden van bench to bedside we een nieuwe methode om te isoleren en verder progenitor cellen uit te breiden zonder het gebruik van dierlijke eiwitten. Gepoolde humane bloedplaatjes lysaat (pHPL) vervangen foetaal runderserum in alle stappen van ons protocol volledig voorkom contact van de cellen om xenogene eiwitten.
Deze video toont een methodologie voor de isolatie en uitbreiding van de stamcellen uit een navelstreng.
Alle materialen en procedures zullen worden beschreven.
Protocol
Discussion
Er is een variëteit aan bronnen van waaruit u MSC's of ECFCs waaronder beenmerg, vetweefsel, navelstrengbloed, enz. te krijgen
Het is noodzakelijk om beide soorten van voorlopercellen uit dezelfde bron om rechtstreeks vergelijken van de betrokkenheid van de verschillende celtypes in processen zoals weefsel en schip regeneratie of bijdrage aan de progressie van de tumor.
Het gemak waarmee te isoleren en vervolgens autologe paren van ECFCs en MSC's studie …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs danken Katharina Schallmoser voor het verstrekken van pHPL, Eva Rohde en Nicole Hofmann voor nuttige opmerkingen bij het manuscript, Daniela Thaler en Margaretha Fr hwirth voor technische bijstand, Monica Farrell voor vertalers, Uwe Lang, Margit Holzapfel en Sandra Eppich bij Dept Verloskunde voor het verstrekken van de koorden.
Dit werk werd ondersteund door de Oostenrijkse Research Foundation (FWF, subsidie N211-NAN naar DS), het Oostenrijkse Research Promotion Agency (FFG verlenen N200 naar de DS) en door The Adult Stem Cell Research Foundation (AR). AR is een fellow van de PhD-programma Molecular Medicine van de Medische Universiteit van Graz.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
References
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
