Aislamiento y suero animal expansión libre de cordón umbilical humano derivado de células mesenquimales del estroma (MSC) y endoteliales formadoras de colonias Células Progenitoras (ECFCs)
Summary
Este protocolo describe el aislamiento y la posterior expansión de células mesenquimales del estroma y las células endoteliales que forman colonias sin el uso de suero animal para generar pares con fines de trasplante autólogo experimental.
Abstract
El cordón umbilical es una fuente rica de células progenitoras con un alto potencial de proliferación de células mesenquimales del estroma incluyendo (también llamados células madre mesenquimales, MSC) y endoteliales que forman colonias células progenitoras (ECFCs). Ambos tipos de células son actores clave en el mantenimiento de la integridad de los tejidos y es probable que también participan en los procesos de regeneración y la formación de tumores.
Para el estudio de su biología y su función en forma comparativa, es importante tener los dos tipos de células disponibles de un mismo donante. También puede ser beneficioso para los propósitos de regeneración para obtener CMM y ECFCs del mismo tejido.
Debido a que la terapéutica celular finalmente debe encontrar su camino desde el laboratorio a la cabecera se estableció un nuevo método para aislar y expandir las células madre sin el uso de proteínas de origen animal. Lisado de plaquetas humanas agrupados (pHPL) reemplazó suero fetal bovino en todas las etapas de nuestro protocolo de evitar por completo el contacto de las células a las proteínas xenogénicas.
Este vídeo muestra una metodología para el aislamiento y la expansión de las células progenitoras del cordón umbilical de uno.
Todos los materiales y los procedimientos se describen.
Protocol
Discussion
Hay una variedad de fuentes de donde obtener MSC o ECFCs incluyendo la médula ósea, el tejido adiposo, sangre del cordón umbilical, etc
Es necesario tener ambos tipos de células progenitoras de la misma fuente para comparar directamente la participación de los diferentes tipos de células en procesos como la regeneración de los tejidos y vasos o contribución a la progresión del tumor.
La facilidad con que para aislar y posteriormente estudio pares autólo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores agradecen a Katharina Schallmoser para proporcionar pHPL, Rohde y Eva Nicole Hofmann por sus valiosos comentarios al manuscrito, Daniela P. Thaler y Margaretha hwirth de asistencia técnica, Mónica Farrell para la edición de lingüística, Uwe Lang, Holzapfel Margit y Sandra Eppich al Departamento de Obstetricia para proporcionar las cuerdas.
Este trabajo ha sido financiado por el Austrian Research Foundation (FMF, la concesión N211-NAN para DS), la Agencia de Promoción de la Investigación de Austria (FFG, otorgar N200 para DS) y por el adulto de células madre de Investigación (AR). AR es un compañero de la medicina molecular programa de doctorado de la Universidad Médica de Graz.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
References
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
