Выделение и животных Сыворотка свободного расширения прав пуповины производных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) и эндотелиальных колонии Формирование клеток-предшественников (ECFCs)
Summary
Этот протокол описывает изоляцию и последующее расширение мезенхимальных стромальных клеток и эндотелиальных клеток, образующих колонии без использования животного сыворотку для получения аутологичных пар в экспериментальных целях трансплантации.
Abstract
Пуповины является богатым источником для клеток-предшественников, с высокой пролиферативной потенциал в том числе мезенхимальных стромальных клеток (также называемые мезенхимальные стволовые клетки, МСК) и эндотелиальных колониеобразующих клеток-предшественников (ECFCs). Оба типа клеток играют ключевую роль в поддержании целостности ткани и, вероятно, также участвует в восстановительных процессов и опухолей.
Для изучения их биологии и функции в сравнительной образом, важно иметь оба типа клетки можно получить и того же донора. Он также может быть полезным для восстановительных целей для получения МСК и ECFCs из той же ткани.
Поскольку сотовая терапии в конечном счете должны найти свой путь от скамьи к постели мы создали новый метод для изоляции и дальнейшему расширению клеток-предшественников, без использования животного белка. Объединенные человека лизат тромбоцитов (pHPL) заменил эмбриональной телячьей сыворотки на всех этапах нашего протокола, чтобы полностью избежать контакта клетки ксеногенных белков.
Это видео демонстрирует методику выделения и расширение клеток-предшественников из одной пуповины.
Все материалы и процедуры будут описаны.
Protocol
Discussion
Существует множество источников, из которых, чтобы получить МСК или ECFCs в том числе костного мозга, жировой ткани, пуповинной крови и т.д.
Необходимо, чтобы получить оба типа прародителей из того же источника напрямую сравнивать участия различных типов клеток в процессах…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы выражают благодарность Катарина Schallmoser за предоставление pHPL, Ева и Николь Роде Хофманн за полезные замечания к рукописи, Даниэла Талер и Маргарета отец hwirth для оказания технической помощи, Моника Фаррелл языковых редактирования, Уве Ланг, Маргит Хольцапфель и Сандра Eppich на кафедра акушерства за предоставление шнуры.
Эта работа была поддержана австрийским исследовательского фонда (FWF, грант N211-NAN для DS), Австрийское агентство по продвижению научных исследований (FFG, грант N200 для DS), так и взрослых стволовых клеток исследовательского фонда (AR). AR является членом программы кандидата молекулярной медицины Медицинского университета Граца.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| alpha modified MEM | Sigma | |||
| L-GLutamin | Sigma | |||
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | |||
| EBM | Lonza | |||
| Single cytokine quots | Lonza | |||
| 75 cm2 flasks | Corning | |||
| 150 cm2 plates | Corning | |||
| Cell scraper | Corning | |||
| Trypsin/EDTA | Sigma | |||
| Monoclonal antibodies | Becton Dickenson | |||
| PBS | ||||
| 50 ml tubes | Falcon | |||
| 500 mL filter 20 μm pore size |
Millipore | |||
| Preservative free heparin | Biochrom |
References
- Schallmoser, K. Human platelet lysate can replace fetal bovine serum for clinical-scale expansion of functional mesenchymal stromal cells. Transfusion. 47, 1436-1446 (2007).
- Reinisch, A. Humanized system to propagate cord blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells for clinical application. Regen Med. 2, 371-382 (2007).
- Reinisch, A. Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo. Blood. 113, 6716-6725 (2009).
- Strunk, D. Phenotypic characterization and preclinical production of human lineage-negative cells for regenerative stem cell therapy. Transfusion. 45, 315-326 (2005).
