Одноклеточный Всасывающая Recordings от фоторецепторов Мышь Конус
Summary
Мы покажем, как для записи вспышка ответов от одного конуса мыши, используя всасывания электрода.
Abstract
Палочек и колбочек фоторецепторов в сетчатке отвечают за свет обнаружения. В темноте, циклических нуклеотидов закрытого (СПГ) каналы во внешнем сегменте являются открытыми и позволяют катионов течь постоянно внутрь через мембрану, деполяризующего клетки. Освещенность вызывает закрытие каналов СПГ, блоки внутрь катионного тока, и таким образом приводит к ячейке гиперполяризации. На основе полярности фоторецепторов, методом всасывания запись была разработана в 1970-х годов, что, в отличие от классического патч-зажим технику, не требует проникновения в мембране<sup> 1</sup>. Рисование внешней сегмента в плотно облегающие стеклянной пипетки заполнены внеклеточной решение позволяет записывать текущие изменения в отдельных клетках на тест-вспышкой. Однако, это устоявшийся »наружного сегмента в (OS-в)" всасывания записи не подходит для записи мыши конуса, из-за низкого процента конусов в сетчатке мышей (3%) и трудности в определении конуса наружные сегменты. В последнее время внутреннего сегмента в (IS-в) запись конфигурации был разработан, чтобы сделать внутренний сегмент / ядерной области фоторецепторов в записи пипетки<sup> 2,3</sup>. В этом видеоролике мы покажем, как для записи с отдельными мыши конус photoresponses использованием одноклеточных всасывания электрода.
Protocol
Discussion
Одноклеточный всасывания записи с фоторецепторных клеток был разработан три десятилетия назад. Это дает нам возможность записи трансмембранный ток изменение, вызванное световой стимуляции, не проникая клеточной мембраны. Из-за высокой межклеточной адгезии, трудно выделить одну здор…
Acknowledgements
Поддержке развития карьеры награду от исследований в области профилактики слепоты, NIH грант Е.Ю. 019312, и неограниченный грант исследований в области профилактики слепоты и EY 02 687 (кафедра офтальмологии и Визуальный наук в Университете Вашингтона).
References
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
