Pez cebra se ha convertido en un poderoso<em> In vivo</em> Plataforma para las pantallas de drogas basada en el fenotipo y el análisis químico genético. Aquí, demostramos un método sencillo y práctico a gran escala de detección de moléculas pequeñas con embriones de pez cebra.
Abstract
Debido a su tamaño pequeño embrión, el rápido desarrollo, la transparencia, la fecundidad, y numerosas similitudes moleculares, morfológicas y fisiológicas de los mamíferos, el pez cebra se ha convertido en un poderoso<em> In vivo</em> Plataforma para las pantallas de drogas basada en el fenotipo y el análisis químico genético. Aquí, demostramos un método sencillo y práctico a gran escala de detección de moléculas pequeñas con embriones de pez cebra.
Protocol
1) la recolección de huevos de pez cebra En la tarde antes del día de la pantalla químicos, creado desde 10 hasta 20 tanques de cría de pez cebra. Llenar cada tanque con agua del sistema de la acuicultura. Utilizando una red de pesca, la transferencia de un macho adulto y uno o dos hembras adultas en el recipiente interior de cada tanque de cría. Separar los peces machos y hembras de unos a otros con un divisor. Etiqueta de las jaulas y poner una tapa sobre ellos. En la mañana de la pantalla, …
Discussion
Cuando se planifica una pantalla de química basada en el pez cebra, se debe prestar especial atención a la solidez del fenotipo en estudio y la tasa previa de tal fenotipo. Esto es particularmente importante para las pantallas de los supresores de química de un fenotipo inducido. Por ejemplo, para un fenotipo causado por la inducción de choque térmico de un transgén, la condición que induce el fenotipo debe ser reproducible con precisión trazado antes de iniciar la pantalla para evitar inaceptablemente altos ín…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Minimum of 20 pairs of adult zebrafish of desired genotype.
Fish nets, Breeding tanks, with removable inner container and dividers (Aquatic Habitats).
Manual pipette pump, 10 mL (Bel-Art Products, Pequannock, NJ).
E3 embryo medium: 5 mM NaCl, 0.17 mM KCl, 0.33 mM CaCl2 , 0.33 mM MgSO4 , containing 0.003% PTU (phenylthio-carbamide, Sigma; St. Louis, MO). PTU can be prepared as a 10x solution by dissolving 0.3-g PTU in 1 L of E3 embryo media. Solutions containing PTU should be protected from light by covering with aluminum foil.
12-channel pipettes, 2-20 μL (Eppendorf).
12-channel pipettes, 3-300 μL (Eppendorf).
Disposable polystyrene pipette basin, 50 mL (Fisher Scientific).
Small molecule library of structurally diverse compounds arrayed in a 96-wll format at 10 mM stock in DMSO. Each master plate is aliquoted into 96-well polypropylene storage plates (Corning), and stored at -80°C until use.
Aluminum sealing tape for 96-well plates (Nunc, Rochester, NY).
DMSO (Sigma, St. Louis, MO).
Basic incubator, 28.5°C (Fisher Scientific).
Stereomicroscope with transmitted light base (Leica Microsystems, Bannockburn, IL).
Hao, J., Williams, C. H., Webb, M. E., Hong, C. C. Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen. J. Vis. Exp. (46), e2243, doi:10.3791/2243 (2010).