Rapid High Throughput Amylose Bepaling in gevriesdroogde aardappelknol Samples

Summary

Dit protocol beschrijft een hoge doorverbonden colorimetrische methode die is gebaseerd op de vorming van een complex tussen jodium en ketens van glucose moleculen in zetmeel. Jodium vormt complexen met zowel amylose en lange ketens binnen amylopectine. Na de toevoeging van jodium aan een zetmeelmonster, de maximale absorptie van amylose en amylopectine optreedt bij 620 en 550 nm respectievelijk. De amylose / amylopectine verhouding kan worden geschat uit de verhouding tussen de 620 en 550 nm absorptiewaarden en ze te vergelijken met een standaard curve waarbij bepaalde bekende concentraties zijn uitgezet tegen absorptiewaarden. Deze hoge throughput, goedkope methode betrouwbaar en reproduceerbaar, waardoor de evaluatie van grote populaties van aardappel klonen.

Abstract

Dit protocol beschrijft een hoge doorverbonden colorimetrische methode die is gebaseerd op de vorming van een complex tussen jodium en ketens van glucose moleculen in zetmeel. Jodium vormt complexen met zowel amylose en lange ketens binnen amylopectine. Na de toevoeging van jodium aan een zetmeelmonster, de maximale absorptie van amylose en amylopectine optreedt bij 620 en 550 nm respectievelijk. De amylose / amylopectine verhouding kan worden geschat uit de verhouding tussen de 620 en 550 nm absorptiewaarden en ze te vergelijken met een standaard curve waarbij bepaalde bekende concentraties zijn uitgezet tegen absorptiewaarden. Deze hoge throughput, goedkope methode betrouwbaar en reproduceerbaar, waardoor de evaluatie van grote populaties van aardappel klonen.

Introduction

Ongeveer 80% van het versgewicht van een aardappel water, vrijwel alle resterende droge stof zetmeel ^1. Het merendeel van het zetmeel (70%) bestaat uit amylopectine, terwijl de rest amylose. De verhouding tussen amylose en amylopectine is de belangrijkste eigenschap die de fysische eigenschappen van zetmeel. Amylose is een lineair alfa 1-4 glucose-keten, terwijl amylopectine een lineair alfa 1-4 ketting met alpha 1-6 vertakkingen ^2. Werkwijzen zoals jodium binden, differentiële scanning calorimetrie (DSC), hoge prestatie grootte-uitsluitingschromatografie (HPSEC) en concanavaline A interacties ontwikkeld voor bepaling zetmeel in verschillende gewassoorten ^3,4. Elk protocol vereist speciale vaardigheden en apparatuur, waardoor het moeilijk te schalen talrijke monsters te kwantificeren tegelijk. De methode die we hier presenteren is een aangepaste protocol van Hovenkamp-Hermelink et al.. ⁵ dat is een dubbele golflengte jodium bindenmethode van gekleurd zetmeelkorrels. De voordelen van deze methode versus andere amylose omvatten de bepaling van onverwerkt zetmeel zonder zuiveren en het gebruik van de dubbele golflengte systeem de nauwkeurigheid van de werkwijze ^4,6 te verhogen.

Protocol

1. Amylose Bepaling van Potato knolzetmeel Schil en snijd verse knollen in kleine blokjes. Plaats aardappelblokjes in kleine bruine zakken en bewaar overnacht bij -80 ° C. Transfer aardappelblokjes aan nylon zakken en voor vriesdrogen. Na gevriesdroogde, slijp de aardappel monster tot poeder met behulp van vijzel en stamper of een Wiley Mill. In een 50 ml buis, voeg 20-30 mg van de gevriesdroogde, gemalen knol monster. Bereid een oplossing van 45% (w / v) per…

Representative Results

De standaardkromme geconstrueerd uit gestanst gegevens van verschillende amylose / amylopectine concentratie oplossingen toont bij benadering absorptie verhoudingen variërend 0,7-1,6 (tabel 1). Een lineaire regressie trendlijn van deze data wordt later gebruikt voor het afleiden van amylose-gehalte in gevriesdroogde aardappel monsters (Figuur 1). De plantaardige productie-omgeving heeft een aantal gevolgen voor de amylose-gehalte in de aardappelknol 7….

Discussion

Zetmeelgehalte in aardappelknollen varieert doorgaans 20-35% ^7,8. Als de meeste waarden buiten dit bereik, deze mogelijke fouten: 1) ruwe gegevens werden gebruikt in plaats van blanked gegevens voor de bouw van de amylose / amylopectine standaard curve 2) ruwe gegevens werden gebruikt in plaats van blanked gegevens voor de bepaling van de amylose / amylopectine-verhoudingen van de aardappel monsters, of 3) het water dat wordt gebruikt voor de analyse was niet zuiver genoeg. We hebben gemerkt dat met gedestill…

Materials

			Reagents
Amylose	Sigma	859656
Amylopectin	Sigma	A8515
Perchloric Acid 60%	Sigma	311413	Very hazardous to skin and eyes
Iodine	Sigma	23214TD
Potassium iodide	Sigma	08625JE
			Equipment
Plate Reader	Bio Tek	ELx800