Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Abstract
Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Introduction
Приблизительно 80% свежего веса клубней картофеля является вода, почти все из оставшегося сухого вещества составляет крахмал 1. Большинство из крахмала (70%) состоит из амилопектина, а остаток амилозы. Соотношение между амилозы и амилопектина является наиболее важным свойством влияния на физические свойства крахмала. Амилоза представляет собой линейный альфа 1-4 цепь глюкозы, а амилопектин представляет собой линейный альфа 1-4 цепь с альфа 1-6 ветвей 2. Методы, такие как йод связывания, дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), размер высокая производительность эксклюзионной хроматографии (HPSEC) и взаимодействия конканавалином были разработаны для определения крахмала в различных видов культур 3,4. Каждый протокол требует специальных навыков и оборудования, что делает его трудно расширить количественно многочисленные образцы одновременно. Метод, который мы приводим здесь представляет собой модифицированный протокол от Hovenkamp-Hermelink др..5, которая является двойной йода волны связыванияМетод, основанный на окрашенных гранул крахмала. Преимущества этого метода по сравнению с другими включать определение амилозы от исходного крахмала без его очистки и использование системы двойной длины волны, чтобы увеличить точность метода 4,6.
Protocol
1. Амилоза Определение от клубня картофеля крахмала Очистить и нарезать свежие клубни мелкими кубиками. Поместите картофель кубиками в небольших коричневых сумок и хранить в течение ночи при -80 ° С Трансфер картофельные кубики на нейлоновые мешки и сублимационной сушк…
Representative Results
Стандартная кривая построена с очищенных данных различных решений концентрационных амилозы / амилопектина показывает приблизительные коэффициенты абсорбции, начиная от 0,7 до 1,6 (табл. 1). Линейной регрессии тенденция по этим данным в дальнейшем используется для выведения сод?…
Discussion
Содержание амилозы в клубней картофеля обычно составляет от 20-35% 7,8. Если большинство значения вне этого диапазона, рассмотреть эти возможные ошибки: 1) необработанные данные были использованы вместо отображаться данные для построения калибровочной кривой амилозы / амилопектина,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Финансирование для этого исследования была предоставлена частично научный сотрудник программы USDA-ARS и Комитета Растениеводство зародышевой плазмы USDA.
Fajardo, D., Jayanty, S. S., Jansky, S. H. Rapid High Throughput Amylose Determination in Freeze Dried Potato Tuber Samples. J. Vis. Exp. (80), e50407, doi:10.3791/50407 (2013).