肺腫瘍細胞募集試験
Summary
本稿では、腫瘍の転移の動物モデルにおける肺腫瘍細胞蓄積を定量化する方法について説明します。
Abstract
腫瘍の転移を支配する分子メカニズム解明のため、モデル動物としてマウスを使用してさまざまな試金が提案されています。ここでは、腫瘍細胞の浸潤や微小転移を評価する簡易測定法を示す.この分析では、腫瘍細胞を尾静脈投与と短い期間後肺解剖し、蓄積されたラベル付けされた腫瘍のセルの個数を消化します。このアッセイの血管に原発腫瘍の侵入の最初のステップをスキップして、遠隔臓器転移が発生するイベントの検討が容易になります。転移の限られた数を観察するための血管に注入された細胞の数を最適化できます。それは、遠隔の臓器の間質細胞が転移に貢献することが報告されています。したがって、このアッセイは、潜在的な治療薬や腫瘍転移予防のためのデバイスを探索する便利なツールかもしれない。
Introduction
腫瘍の転移は癌関連疾患の高い死亡率を占めています。分子レベルで調査の観点から転移が複数のステップに分けることができます: 原発腫瘍部位、腫瘍の成長と周囲の組織、intravasation、血管の循環に侵入で腫瘍開始、遠隔臓器や腫瘍の再増殖で血管外漏出。各ステップには、異なる分子/信号の1のセットが含まれます。
研究は、腫瘍細胞が転移前フェーズ2,3,4,5は別名、血の循環を開始する前に、遠く離れた臓器に発生するイベントに注目しました 6。マウス モデル研究では、転移前の相が肺のと低レベルの長期的な炎症性応答を作成することによって肺転移を促進を明らかにしました。転移前の相は themicrovasculature の血管、骨髄由来細胞 (腎不全) の採用、S100A8 と SAA33,4を含むサイトカイン/ケモカインのような分子の発現によって特徴付けられる.そのリジルオキシダーゼ変更黒谷7を募集する肺の細胞外マトリックスといわれています。別のレポートは前転移相8Angpt2、MMP3、および MMP10 の重要性を明らかにしました。つまり、原発性腫瘍、骨髄、およびリモート臓器間の複雑な相互作用を理解し正しく (例えば、によってこれらの相互作用に関与する蛋白質を目標とする薬剤を使用して) 変調必要があります9 今後の転移を防ぐために.転移前の相を調整するため、それする必要があります最初可視化し、診断や治療介入の評価。ここでは、肺の転移前の相の研究を可能にする肺腫瘍細胞募集試験を報告します。
マウスの血管に直接注入する腫瘍細胞は、培養細胞の違いはありますが、癌患者の腫瘍細胞を循環し、循環腫瘍細胞に似ています。原発腫瘍から循環に入るときいくつかの特徴的な変化を受ける循環腫瘍細胞自身。それにもかかわらず、培養細胞は、免疫不全マウスの尾静脈に注入されるとき、腫瘍を形成できます。さらに、マウスの系における蛍光腫瘍細胞を標識使用できます体内でこれらの細胞の追跡を許可します。循環腫瘍細胞の挙動はがん患者10で究極の結果を決定するために重要です。血液は腫瘍細胞2の生存のための良い場所ではないです。彼らは宿主の免疫系による攻撃からの脱出、物理的なサポートの不足のためのアポトーシスを防ぐために抗アポトーシス シグナルを必要とする必要があります。転移巣の腫瘍開始のより高い能力を持つ腫瘍細胞より多くの腫瘍結節を生成します。腫瘍細胞は、特定の臓器親和性を示す、それらの特定の臓器に転移が守らなければ。この分析では、転移の翼列 (原発腫瘍の増殖および浸潤) の最初の手順は含まれていません、循環腫瘍細胞と間質細胞 (内皮細胞、上皮細胞、血液細胞) 間の相互作用にフォーカスがあるので。従来腫瘍細胞注入分析の研究者は腫瘍結節の転移を検出するための具体的なサイズになるまで待たなければなりません。この場合、血管に腫瘍細胞の正確な数を定量化することはできません。さらに、このプロセスには、腫瘍細胞の他の要因が結果に影響を与える可能性がありますを示す腫瘍の再生の段階が含まれています。
カウント標識蛍光顕微鏡下で腫瘍細胞は単純なプロセスです。個人差は、全肺をスキャンすることができますように、広い視野を提供します。フローサイトメトリーは、また即座に組織に腫瘍細胞の正確な数を与える便利なツールです。共焦点顕微鏡下組織に蛍光セルをカウントも可能です、転移性腫瘍細胞の最も正確な画像が表示されますが、それは時間がかかり、選択した領域がカウントされる場合にのみ偏りのある結果を与える可能性があります。この試金の究極の目標は、腫瘍細胞が肺に蓄積される方法を簡単に観察することです。既に報告されている3,4, 肺前転移段階第一次腫瘍から炎症性シグナル伝達のための場合、注入された腫瘍細胞はこうして肺転移の高い可能性を示唆、肺に蓄積する傾向があります。(慢性関節リウマチ、喘息、等) 他の条件とその治療法 (抗 tnf α) などの抗炎症剤は肺転移を減衰させる可能性があります。したがって、この試金は肺転移の可能性を評価するための強力なツールであることが分かった。
Protocol
Representative Results
Discussion
マウス抗体、薬、高脂肪の食事療法または腫瘍細胞の注入前に腫瘍エアコン中の前処理が可能です。この試金で最も困難なステップは、尾静脈注射です。不完全な注入は決定的なデータを結果します。C57bl/6 の尾静脈は、失敗した注射の結果を識別し、特に困難です。役立ちます加熱パッド (37 ° C) にマウスを配置する尾静脈注入が容易になるようにを拡張させます。
こ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
どれも
Materials
| Collagenase | Sigma | C6885 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Bovine serum albumin | Sigma | A7030 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | no calcium, no magnesium |
| Deoxyribonuclease I | Sigma | DN-25 | trace amount |
| RBC lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer | BD | 352340 | 40 micrometer mesh |
| Fluorescence labeling kit | Sigma | MIN26-KIT | |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| 0.22 μm syringe filter | sartorius | 17597K | |
| O.C.T. compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| 4% Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution | Wako | 163-20145 |
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