Akciğer tümör hücre işe alım tahlil
Summary
Bu el yazması tümör hücresi birikimi Akciğerlerde tümör metastazı, bir hayvan modeli ölçmek için bir yöntem açıklanır.
Abstract
Tümör metastazı yöneten moleküler mekanizmaları araştırmak için çeşitli deneyleri fareyi kullanarak bir modeli hayvan olarak önerilmiştir. Burada, tümör hücre ekstravazasyonu veya micrometastasis değerlendirmek için basit bir tahlil göstermektedir. Bu tahlil, tümör hücreleri kuyruk ven enjekte edildi ve kısa bir süre sonra akciğerleri disseke ve birikmiş etiketli tümör hücreleri saymak için sindirilmiş. Bu tahlil birincil tümör işgalinin ilk adımı damar atlar ve tümör metastazı oluştuğu uzak organ etkinlikte çalışma kolaylaştırır. Damar enjekte hücre sayısı Metastazlari sınırlı sayıda gözlemlemek için optimize edilmiş olması. Stromal hücreler uzak organ metastazı için katkıda rapor edildi. Böylece, bu tahlil potansiyel terapötik uyuşturucu ya da tümör metastazı önlenmesi için aygıt keşfetmek için yararlı bir araç olabilir.
Introduction
Tümör metastazı kanserle ilgili hastalıklarda yüksek ölüm oranı hesaplar. Moleküler seviyede araştırmalar bakış açısıyla, metastaz birden çok adımı ayrılabilir: tümör başlangıcında birincil tümör sitesi, birincil tümör büyüme ve çevreleyen dokular, intravasation, kan dolaşımı kan damarları aracılığıyla içine işgali , uzak organlara ve tümör yeniden büyüme ekstravazasyonu. Her adım molekülleri/sinyalleri1farklı grupları içerir.
Çalışmalar bugüne tümör hücreleri olarak da bilinen önceden metastatik faz2,3,4,5olan kanda dolaşan başlamadan önce uzak organlarda meydana gelen olaylarla ilgili, 6. Fare modeli çalışmalarımız önceden metastatik faz akciğerlerde uzun ömürlü ve düşük seviyeli inflamatuar yanıt oluşturarak akciğer metastazı kolaylaştırır saptandı. Önceden metastatik faz ile karakterize themicrovasculature hyperpermeability, kemik iliği türetilmiş hücre (BMDC) alımı ve upregulation3,4 S100A8 ve SAA3 de dahil olmak üzere sitokin/Kemokin-gibi moleküllerin tarafından . Bu o lysyl oksidaz BMDCs7askere akciğerlerde hücre dışı matriks değiştirir bildirilmiştir. Başka bir rapor önceden metastatik faz8‘ Angpt2, MMP3 ve MMP10 önemini ortaya koymuştur. Başka bir deyişle, birincil tümörler, kemik iliği ve uzak organlara arasındaki karmaşık etkileşimler anlaşılır olması ve düzgün (örneğin, proteinler bu etkileşimlerde yer hedef uyuşturucu kullanarak) modülasyonlu gerek gelecekteki metastaz9 önlemek için . Önceden metastatik faz düzenlemek için olmalı ilk görüntülenir ve tanı veya tedavi müdahaleler için değerlendirilir. Burada, önceden metastatik akciğer aşamasında çalışma sağlar bir akciğer tümör hücre işe alım tahlil raporu.
Tümör hücreleri doğrudan fareyi damar enjekte olabilir her ne kadar kültürlü hücreleri arasındaki farklar tümör hücreleri kanser hastalarında dolaşan ve tümör hücreleri dolaşan benzer. Dolaşım birincil tümöründen girdiğinizde tümör hücreleri dolaşan kendilerini bazı karakteristik değişiklikleri meydana. Yine de, onlar kuyruk damarda enjekte edildiğinde kültürlü hücreleri immünyetmezligi farelerde tümör oluşabilir. Ayrıca, fare modeli sistemi tümör hücreleri etiketli Floresans izleme bu hücreler vücuttaki izin kullanılabilir. Onlar kanser hastaları10nihai sonuçları belirlemek gibi kritik tümör hücreleri dolaşan davranıştır. Kan tümör hücreleri2hayatta kalmak için iyi bir yer değil. Ana bilgisayar bağışıklık sistemi tarafından saldırısından kaçıp apoptosis fiziksel destek eksikliği nedeniyle önlemek için anti-apoptotik sinyal gerekir ihtiyaçları var. Tümör hücrelerinin tümör başlama metastatik sitelerde daha yüksek yetenekleri ile daha fazla tümör nodüller oluşturur. Tümör hücreleri belirli organ tropism gösterirsen, metastaz belirli organları dikkat edilmelidir. Bu tahlil, metastatik cascade (birincil tümör büyüme ve işgali) ilk adımlar dahil değildir de odak dolaşan tümör hücreleri ve stromal hücreler (endotel hücreleri, epitel hücreleri ve kan hücreleri) arasındaki etkileşimi öyle. Geleneksel tümör hücre enjeksiyon deneyleri araştırmacılar tümör nodüller metastaz algılamak için somut bir boyuta büyümek kadar beklemek zorunda. Bu durumda, tümör hücreleri kan damarı içinde tam sayısını sayısal olamaz. Ayrıca bu işlem tümör hücreleri diğer faktörler sonucu etkileyebilir gösteren bir tümör büyütme aşama içerir.
Sayma tümör hücreleri floresan stereomicroscope altında etiketli basit bir işlemdir. Böylece bütün akciğer taranabilir stereomicroscope geniş görüş alanı sağlar. Akış Sitometresi da tümör hücreleri doku doğru sayıda anında veren yararlı bir araçtır. Floresan confocal mikroskop altında doku hücrelerinde sayma olanağı da sağlar ve metastatik tümör hücreleri en doğru resimlerini görüntüler, ama zaman alıcı ve seçili bir alanın sayılır Eğer sadece önyargılı sonuçlar verebilir. Bu tahlil, nihai hedefi ne kadar kolay Akciğerlerde tümör hücreleri birikir gözlemlemektir. Akciğerleri inflamatuar birincil tümöründen sinyal nedeniyle önceden metastatik aşamasında ise3,4, daha önce bildirildiği gibi enjekte tümör hücreleri böylece daha yüksek akciğer metastazı olasılığı ima akciğerlerde biriken yatkındır. Diğer koşullar (romatoid artrit, astım, vb) ve anti-enflamatuar ajanlar (gibi anti-TNFα) ile tedavi akciğer metastazı azaltmak. Böylece, bu tahlil akciğer metastazı olasılığı değerlendirmek için güçlü bir araç olduğu sonucuna varıldı.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ön arıtma farelerin antikorlar, uyuşturucu, yüksek yağlı diyet ya da tümör şartına orta önce tümör hücre enjeksiyon ile mümkündür. En zor bu tahlil kuyruk ven enjeksiyon adımdır. Eksik enjeksiyon sonuçsuz verilerde sonuçlanır. Kuyruk ven C57BL/6 başarısız enjeksiyonları sonucu tespit etmek, özellikle zordur. Enjeksiyon daha kolay olur, böylece bir Isıtma yastığı (37 ° C) fareyi yerleştirerek yardımcı olur kuyruk ven genişletmek.
Bu tahlil çok hasta kan iç…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Hiçbiri
Materials
| Collagenase | Sigma | C6885 | |
| Dispase | Gibco | 17105-041 | |
| Bovine serum albumin | Sigma | A7030 | |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | no calcium, no magnesium |
| Deoxyribonuclease I | Sigma | DN-25 | trace amount |
| RBC lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer | BD | 352340 | 40 micrometer mesh |
| Fluorescence labeling kit | Sigma | MIN26-KIT | |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | |
| 0.22 μm syringe filter | sartorius | 17597K | |
| O.C.T. compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| 4% Paraformaldehyde Phosphate Buffer Solution | Wako | 163-20145 |
References
- Valastyan, S., Weinberg, R. A. Tumor metastasis: molecular insights and evolving paradigms. Cell. 147 (2), 275-292 (2011).
- Kaplan, R. N., et al. VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche. Nature. 438 (7069), 820-827 (2005).
- Hiratsuka, S., Watanabe, A., Aburatani, H., Maru, Y. Tumour-mediated upregulation of chemoattractants and recruitment of myeloid cells predetermines lung metastasis. Nature Cell Biology. 8 (12), 1369-1375 (2006).
- Hiratsuka, S., et al. The S100A8-serum amyloid A3-TLR4 paracrine cascade establishes a pre-metastatic phase. Nature Cell Biology. 10 (11), 1349-1355 (2008).
- Tomita, T., Sakurai, Y., Ishibashi, S., Maru, Y. Imbalance of Clara cell-mediated homeostatic inflammation is involved in lung metastasis. Oncogene. 30 (31), 3429-3439 (2011).
- Deguchi, A., et al. Serum amyloid A3 binds MD-2 to activate p38 and NF-κB pathways in a MyD88-dependent manner. Journal of Immunology. 191 (4), 1856-1864 (2013).
- Erler, J. T., et al. Hypoxia-induced lysyl oxidase is a critical mediator of bone marrow cell recruitment to form the premetastatic niche. Cancer Cell. 15, 35-44 (2009).
- Huang, Y., et al. Pulmonary vascular destabilization in the premetastatic phase facilitates lung metastasis. 癌症研究. 69 (19), 7292-7237 (2009).
- Sceneay, J., Smyth, M. J., Möller, A. The pre-metastatic niche: finding common ground. Cancer Metastasis Reviews. 32 (3-4), 449-464 (2013).
- Castle, J., Shaker, H., Morris, K., Tugwood, J. D., Kirwan, C. C. The significance of circulating tumor cells in breast cancer: A review. The Breast. 23, 552-560 (2014).
- Wolf, M. J., et al. Endothelial CCR2 signaling induced by colon carcinoma cells enables extravasation via the JAK2-Stat5 and p38MAPK pathway. Cancer Cell. 22 (1), 91-105 (2012).
- Hiratsuka, S., et al. Primary tumours modulate innate immune signalling to create pre-metastatic vascular hyperpermeability foci. Nature Communications. 4, 1853 (2013).
- Deguchi, A., et al. Eritoran inhibits S100A8-mediated TLR4/MD-2 activation and tumor growth by changing the immune microenvironment. Oncogene. 35 (19), 1445-1456 (2016).
- Ieguchi, K., et al. ADAM12-cleaved ephrin-A1 contributes to lung metastasis. Oncogene. 33 (17), 2179-2190 (2014).
