עירוי צינור הלבלב: שיטה יעילה וסלקטיבית של סמים ומשלוח ויראלי
Summary
עירוי צינור הלבלב היא טכניקה חשובה שיכולה לאפשר מעקב אחר שושלת, הקדמת גנים, פילוח ספציפי לקו התא. טכניקת עירוי צינור הלבלב עבור משלוח סמים ויראלי לתאי הלבלב מוצג כאן.
Abstract
הלבלב הוא איבר ביפון עם מרכיבים אנדוקריניים ואקסוקריניים כאחד. מספר פתולוגיות עלולות להכאיב ללבלב, כולל סוכרת, דלקת לבלב וסרטן הלבלב. כל שלוש המחלות הללו מסמנות תחומי מחקר פעילים, לא רק כדי לפתח טיפול מיידי, אלא גם כדי להבין טוב יותר את הפתופיזיולוגיה שלהם. ישנם מעט כלים לקידום תחומי לימוד אלה. עירוי צינור הלבלב היא טכניקה חשובה שיכולה לאפשר מעקב אחר שושלת, הקדמת גנים, פילוח ספציפי לקו התא. הטכניקה דורשת את הניתוח המורכב של החלק השני של התריסריון והאמפולה, ואחריו החסם של צינור המרה ואת cannulation של צינור הלבלב. למרות הטכניקה היא מבחינה טכנית מאתגר בהתחלה, היישומים הם רבים. העמימות בפרטי ההליך בין הקבוצות הדגישה את הצורך בפרוטוקול סטנדרטי. עבודה זו מתארת את הביטוי של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) בתוך הלבלב לאחר עירוי צינור הלבלב של וקטור ויראלי המבטא GFP לעומת ניתוח מזויף. עירוי ולכן הביטוי הוא ספציפי ללבלב, ללא ביטוי נוכח בכל סוג רקמה אחר.
Introduction
הלבלב הוא איבר בימפונקציוני, עם מרכיבים אנדוקריניים ואקסוקריניים כאחד. מספר פתולוגיות יכולות לייעל את הלבלב, כולל סוכרת, דלקת לבלב וסרטן הלבלב1. כל שלוש המחלות הללו מסמנות תחומי מחקר פעילים, לא רק כדי לפתח טיפול מיידי, אלא גם כדי להבין טוב יותר את הפתופיזיולוגיה שלהם.
שיטת משלוח טיפולי ממוקדת תועיל. פיתחנו טכניקת עירוי צינור הלבלב כי היא שיטה יעילה סלקטיבית עבור משלוח סמים ויראלי לתאי הלבלב. במודל זה, צינור הלבלב הוא cannulated באופן סלקטיבי, ואת צינור המרה הנפוצה הוא נאטם, המאפשר משלוח אך ורק ללבלב.
טכניקה זו יכולה לאפשר מעקב שושלת של סוגי תאים ספציפיים כדי לפרט עוד יותר את המסלולים ההתפתחותיים החשובים להתפתחות הלבלב ופתולוגיה2,3. מקדמים שונים בווקטורים ויראליים מאפשרים פילוח ספציפי של קווי תאים ולהכנסת גנים לקווי תאים אלה4,5. עבודה זו מדגימה את הביטוי של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) בתוך הלבלב לאחר עירוי צינור הלבלב של וקטור ויראלי המבטא GFP לעומת ניתוח מזויף.
Protocol
Representative Results
Discussion
עבודה זו מתארת בפירוט את המתודולוגיה שמאחורי עירוי צינור הלבלב, מודל עכבר יעיל להעברת גנים ומולקולות אחרות באופן ספציפי ויעיל ללבלב. עמימות בפרטי ההליך בין קבוצות שונות הדגישה את הצורך בפרוטוקול סטנדרטי8,9,10.
ישנם מספר שלב?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
למחברים אין הכרות. המימון התקבל מהוועדה לבריאות ולתכנון המשפחה של מחוז ג’ה-ג’יאנג (מענק 20146242) ומקרן הלשכה למדע וטכנולוגיה של וונג’ואו (מענק Y20140248).
Materials
| Mice (25-30g, 8-12 weeks old) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| Ethanol (70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| Sterile Saline Solution | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| Protective Equipment | |||
| Hair Removal Product | Nair or trimmer | ||
| Gauze Pads 2in x 2in | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| Needles (30.5G and 25G) | Becton Dicksinson and Co. | 305106 and 305122 | |
| Syringe for Ketofen and Saline | Becton Dicksinson and Co. | 309657 | |
| Syringe for Pump | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| Infusion Pump | Pump Systems Inc. | NE-1000 | |
| Infusion Catheter | World Precision Instruments | CMF31G | |
| Curved Bulldog Clamps (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga Forceps | Roboz | RS-5163 | |
| Adson Forcep | Roboz | RS-5234 | |
| Needle Holder | Roboz | RS-7882 | |
| Scissor | Roboz | RS-5982 | |
| Cotton Tip Applicators | Physician Sales and Services | 22-9988 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Suture | Owens and Minor | SXMD1B402 |
References
- Gittes, G. K. Developmental biology of the pancreas: a comprehensive review. Dev Biol. 326 (1), 4-35 (2009).
- Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors. Development. 129 (10), 2447-2457 (2002).
- Weinberg, N., Ouziel-Yahalom, L., Knoller, S., Efrat, S., Dor, Y. Lineage tracing evidence for in vitro dedifferentiation but rare proliferation of mouse pancreatic beta-cells. Diabetes. 56 (5), 1299-1304 (2007).
- Raper, S. E., DeMatteo, R. P. Adenovirus-mediated in vivo gene transfer and expression in normal rat pancreas. Pancreas. 12 (4), 401-410 (1996).
- Xiao, X., et al. Pancreatic cell tracing, lineage tagging and targeted genetic manipulations in multiple cell types using pancreatic ductal infusion of adeno-associated viral vectors and/or cell-tagging dyes. Nat Protoc. 9 (12), 2719-2724 (2014).
- Song, Z., et al. EGFR signaling regulates beta cell proliferation in adult mice. J Biol Chem. 291 (43), (2016).
- Xiao, X., et al. M2 macrophages promote beta-cell proliferation by up-regulation of SMAD7. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (13), E1211-E1220 (2014).
- Laukkarinen, J. M., Van Acker, G. J., Weiss, E. R., Steer, M. L., Perides, G. A mouse model of acute biliary pancreatitis induced by retrograde pancreatic duct infusion of Na-taurocholate. Gut. 56 (11), 1590-1598 (2007).
- Lichtenstein, A., et al. Acute lung injury in two experimental models of acute pancreatitis: infusion of saline or sodium taurocholate into the pancreatic duct. Crit Care Med. 28 (5), 1497-1502 (2000).
- Perides, G., van Acker, G. J., Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct. Nat Protoc. 5 (2), 335-341 (2010).
- Guo, P., et al. Specific transduction and labeling of pancreatic ducts by targeted recombinant viral infusion into mouse pancreatic ducts. Lab Invest. 93 (11), 1241-1253 (2013).
- Xiao, X., et al. Neurogenin3 activation is not sufficient to direct duct-to-beta cell transdifferentiation in the adult pancreas. J Biol Chem. 288 (35), 25297-25308 (2013).
