Infusão do ducto pancreático: um método eficaz e seletivo de medicamentos e entrega viral
Summary
A infusão do ducto pancreático é uma técnica importante que pode permitir o rastreamento de linhagem, introdução genética e segmentação específica da linha celular. Uma técnica de infusão de dutos pancreáticos para a entrega de drogas e virais para células pancreáticas é apresentada aqui.
Abstract
O pâncreas é um órgão bifuncional com componentes endócrinos e exócrinos. Várias patologias podem afligir o pâncreas, incluindo diabetes, pancreatite e câncer de pâncreas. Todas essas três doenças marcam áreas ativas de estudo, não apenas para desenvolver terapia imediata, mas também para entender melhor sua fisiopatologia. Existem poucas ferramentas para promover essas áreas de estudo. A infusão do ducto pancreático é uma técnica importante que pode permitir o rastreamento de linhagem, introdução genética e segmentação específica da linha celular. A técnica requer a dissecação intrincada da segunda porção do duodeno e da ampola, seguida pela oclusão do ducto biliar e pela canulação do ducto pancreático. Embora a técnica seja tecnicamente desafiadora no início, as aplicações são miríades. A ambiguidade nas especificidades do procedimento entre os grupos destacou a necessidade de um protocolo padrão. Este trabalho descreve a expressão de uma proteína fluorescente verde (GFP) dentro do pâncreas após a infusão do ducto pancreático de um vetor viral expressando GFP versus uma cirurgia falsa. A infusão e, portanto, a expressão é específica para o pâncreas, sem expressão presente em qualquer outro tipo de tecido.
Introduction
O pâncreas é um órgão bifuncional, com componentes endócrinos e exócrinos. Uma série de patologias podem afligir o pâncreas, incluindo diabetes, pancreatite e câncer de pâncreas1. Todas essas três doenças marcam áreas ativas de estudo, não apenas para desenvolver terapia imediata, mas também para entender melhor sua fisiopatologia.
Um método de entrega terapêutica direcionado seria benéfico. Desenvolvemos uma técnica de infusão de dutos pancreáticos que é um método eficaz e seletivo para a entrega de drogas e virais para células pancreáticas. Neste modelo, o ducto pancreático é seletivamente cânulado, e o ducto biliar comum é ocluído, permitindo a entrega exclusivamente ao pâncreas.
Essa técnica pode permitir o rastreamento de linhagem de tipos celulares específicos para elucidar ainda mais as vias de desenvolvimento importantes para o desenvolvimento pancreático e patologia2,3. Diferentes promotores em vetores virais permitem o direcionamento específico das linhas celulares e para a introdução de genes nessas linhas celulares4,5. Este trabalho demonstra a expressão de uma proteína fluorescente verde (GFP) dentro do pâncreas após a infusão do ducto pancreático de um vetor viral expressando GFP versus uma cirurgia falsa.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este trabalho descreve em detalhes a metodologia por trás da infusão do ducto pancreático, um modelo eficaz de camundongos para a entrega de genes e outras moléculas especificamente e efetivamente no pâncreas. A ambiguidade nas especificidades do procedimento entre vários grupos destacou a necessidade de um protocolo padronizado8,9,10.
Existem várias etapas críticas do procedimento, começando…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores não têm reconhecimentos. O financiamento foi recebido da Fundação de Saúde e Planejamento Familiar da Província de Zhejiang (Grant 20146242) e da Fundação wenzhou Science & Technology Bureau (Grant Y20140248).
Materials
| Mice (25-30g, 8-12 weeks old) | Jackson Laboratory | ||
| Ketofen | Henry Schein Inc. | 5487 | |
| Ethanol (70%) | Sigma-Aldrich | 34923 | |
| Sterile Saline Solution | Baxter Healthcare Corp. | 2B-13-00 | |
| Protective Equipment | |||
| Hair Removal Product | Nair or trimmer | ||
| Gauze Pads 2in x 2in | Fisher Healthcare | 22-362-178 | |
| Needles (30.5G and 25G) | Becton Dicksinson and Co. | 305106 and 305122 | |
| Syringe for Ketofen and Saline | Becton Dicksinson and Co. | 309657 | |
| Syringe for Pump | Henke Sass Wolf | 4010.200V0 | |
| Infusion Pump | Pump Systems Inc. | NE-1000 | |
| Infusion Catheter | World Precision Instruments | CMF31G | |
| Curved Bulldog Clamps (2) | Roboz | RS-7439 | |
| Arruga Forceps | Roboz | RS-5163 | |
| Adson Forcep | Roboz | RS-5234 | |
| Needle Holder | Roboz | RS-7882 | |
| Scissor | Roboz | RS-5982 | |
| Cotton Tip Applicators | Physician Sales and Services | 22-9988 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Suture | Owens and Minor | SXMD1B402 |
References
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