쥐의 Sectioned 아 킬 레 스 힘 줄의 치유 과정에서 수용자 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)의 효과: 방법론 설명

Summary

이 프로토콜 아 킬 레 스 힘 줄의 일부를 제거한 후 수용자 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 또는 염 분 해결책 주입 되어 쥐에 있는 힘 줄 치유의 평가 과정을 설명 합니다. 힘 줄 치유의 진행은 분석의 다른 종류를 사용 하 여 여러 개의 시간 지점에서 계산 됩니다.

Abstract

이 문서에서는 PRP 긍정적으로 영향을 미칠 수 힘 줄 치유를 관찰 하는 데 사용 하는 실험 절차를 설명 합니다. 따라 4 주요 단계가 있다: 킬;에서 병 변 유발 PRP를 준비 하 고 주사 (또는 염 분 해결책); 제거 힘; 그리고 수행 평가 biomechanical, 분자, 그리고 조직학. 각 단계에서 모든 절차와 방법을 설명 세부 사항, 그래서 그들은 쉽게 재생 될 수 있다 합니다.

아 킬 레 스 힘 줄 수술 sectioned 5-m m 긴 섹션의 (제거) 되었습니다. 이후에, PRP 또는 염 류 용액 공부 PRP에 힘 줄의 치료에 긍정적인 영향을 주입 했다. (총 120 쥐가이 연구에 사용 되었다) 40 동물의 3 개 그룹 2 하위 그룹으로 세분화 했다: PRP 주사 그룹 및 식 염 수 주입 제어 그룹. 쥐가 증가 하는 시간 포인트 (그룹 a: 5 일;에 희생 했다 그룹 b: 15 일; 그룹 c: 30 일)와 힘 줄이 제거 되었습니다. 90 힘 줄 수술 biomechanical transcriptomic 분석을 수행 하기 전에 테스트 하 고 30 나머지 힘 줄 조직학 분석을 제출 했다.

Introduction

응고, 염증 성 프로세스 및 혈소판의 면역 변조 역할은 잘 알려진¹입니다. 최근에, 그들은 또한 회복 속성^2,3는 증명 되었습니다. 실제로, 다양 한 cytokines 및 성장 요인 (VEGF, PDGF, TGF B, IGF-난, 그리고 HGF) degranulation 동안 혈소판에 의해 발표. 이러한 성장 요인 홍보 신생, 조직 리 모델링, 그리고 상처 치유 (뼈, 피부, 근육, 힘 줄)². 격리 방법 높은 혈소판 농도 포함 된 혈소판 리치 플라즈마 (PRP)을 생성 centrifuging 혈액 헌 혈 (3 사이 10 시간 기준 농도 혈액). 실제로, 다양 한 PRP 준비 기술 동일한 최종 제품을 제공할 수 없습니다. 지금 까지는,이 문제에 아무 국제 일반 계약이 되었습니다. 전반적으로, PRP 치료 tendinopathy, 발바닥의 근 막 염, 관절염, 등 없앤⁴만성 musculoskeletal 조건에 대 한 매력적인 치료 옵션 일 수 있었다. 그것은 개선 하 고 뼈 임 플 란 트 삽입 후 치유를 가속 구강 수술 및 implantology⁴ 에서 처음으로 사용 되었다. 이 연구에서 우리는 동물 실험⁴에 대 한 PRP의 수집 수 있는 재연 가능한 방법도 설명 합니다.

힘 줄의 병 변을 자주 운동과 육체 노동자에서 관찰 된다, 이후 큰 관심⁵는 치유 과정와 따라서 복구 시간을 단축. 자주 개발 하는 새로운 치료 방법을 성장 인자를 사용 하 여 포함 하 고 PRP의 내 인 성 성장 요인⁴의 조화를 제공 하는 간단 하 고 최소한 침략 적 방법 이다.

여러 생체 외에서 또는 동물 연구 생물학 중재자를 방출 하 여 혈소판, 높은 수준의 포함 된 플라즈마의 생물학 중재자^{6 를 방출 하 여 힘 줄과 인 대 복구를 자극 수 증명 7,,89}. 또한, 다른 연구 PRP 유형 I 및 III 콜라겐 합성 힘 줄에^9,,1011세포 자극 수 있습니다 나타났습니다. 그것은 또한 건의 되었다 PRP 매트릭스 metalloproteinases (MMPs)의 활성화를 감소 하 고 따라서 매트릭스의 저하를 줄일 수 있습니다. 염증 과정에 관련 된 셀 MMP-9, 조직 리 모델링 (생리와 pathologic) 염증¹²에 의해 유도 된에서 역할을 생성할 수 있습니다.

이 정보를 바탕으로, 우리가 쥐의 sectioned 아 킬 레 스 힘 줄에 단일 PRP 주사 복구 과정과 복구 조직의 기계적 강도 향상 시킬 수 있을 것을 가정 했다. 이 복구 프로세스 동안 치유 힘 줄의 biomechanical 속성을 측정 하 여 및 새로 형성된 된 조직에서 개장 하는 콜라겐을 평가 하는 조직학 및 분자 분석을 수행 하 여 테스트 됩니다. 연구의 목표는 경우 수용자 PRP의 단일 주사를 영향을 미칠 수 sectioned 아 킬 레 스 힘 줄의 치유를 관찰 했다.

Protocol

배려 및 처리는 동물의 배려를 위한 가이드에 따라 수행 된 실험 동물의 사용 국립 과학 아카데미의에 의해 준비 하 고 출판에 의해 국립 연구소의 건강 (미국). 유럽 및 국가 입법 신중 하 게 따라 했다. 1. 동물 준비 132 2 개월 된 남성 Sprague-Dawley 쥐 320-450 g (120 쥐 실험에 대 한) 및 12 쥐 혈액 샘플링, 그림 1에 대 한 무게를 사용 합니다. Dell<sup class="…

Representative Results

결과 뜻의 평균 ± 표준 편차로 표현 하 고 분산 분석 (ANOVA)와 비교 했다. 양방향의 ANOVA와 임시 게시 테스트 데 있어, 파라메트릭 테스트, 사용 되었다. 쥐의 비 부상 아 킬 레 스 힘 줄의 파열을 자극 하는 데 필요한 궁극 장력 강도 (UTS)는 42.0 ± 5.7 N (n = 10). 인장 강도 크게 증가 (p < 0.0001) 5 일 후 두 그룹에서. 두 그룹을 비?…

Discussion

혈소판은 프로세스를 치유 하는 힘 줄의 염증 초기 단계에 대 한 필수적입니다. 이러한 혈소판 바인딩 조직이 나 응고 유발 요인에 노출 되는 때 그들은 α과 립에 방류 하는 성장 인자를 발표할 예정 이다. 이 상호 작용으로 인해 세포 외 매트릭스 고분자 synthetized 고 중간 엽 세포 증식. 혈소판에는 또한 신생 및 세포질 감 별 법^6,20을 자극, 혈액 순환 조?…

Materials

Xylazine (Xyl-M)	VMD	none	anesthetic
Ketamin (Jétamine 1000 CEVA)	CEVA Santé Animale	none	anesthetic
Buprenorphin (Vetergésic Multidosis)	ALSTOE	none	Painkiller
iso-Betadine	MEDA-Pharma	none	Desinfectant
resorbable yarn Vicryl 6/0	Johnson & Johnson
Nembutal	CEVA Santé Animale	none	Anesthetic
Paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	P6148	Preserves structure of the tissue
Isopropanol 100%	VWR	20,922,364
Ethanol 95%	VWR	20,823,362
Xylene	VWR	28973.363
Paraffin	VWR	LEIC3950.1006
Hematoxylin	Millipore	1.15938.0025	Colorant
Eosin	Millipore	1.15935.0100	Colorant
Eukitt	Sigma-Aldrich	3989	Mounting Medium
CaCl2