Summary

تشريح وإعداد شريحة الاكليلية وضع الغدة النخامية الماوس

Published: November 16, 2017
doi:

Summary

نقدم بروتوكولا لتشريح الغدد النخامية وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية من الفئران البلدان النامية.

Abstract

الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن. يتكون من الغدد اثنين مع أصول الجنينية منفصلة والوظائف – في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس. الغدة النخامية الماوس نامية صغيرة وحساسة بشكل بيضاوي ممدود. مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس.

والهدف من هذا البروتوكول تحقيق الأقسام الاكليلية الغدة النخامية سليمة مع أبنية الأنسجة المحفوظة جيدا من البلدان النامية الفئران. ونحن في هذا البروتوكول، تصف بالتفصيل كيفية تشريح ومعالجة الغدد النخامية بشكل صحيح من البلدان النامية الفئران. أولاً، يحدد نضح ترانسكارديال الفورمالدهايد قبل تشريح الفئران. ثم يتم تطبيق ثلاث تقنيات تشريح مختلفة للحصول على الغدد النخامية سليمة تبعاً لعمر الفئران. للفئران الجنينية سن 17.5 يوما الجنينية (ه)-18.5 وحديثي الولادة تصل إلى 4 أيام، هي تشريح لمنطقتي سيلا كامل بما في ذلك عظم وتدي والغدة تريجيمينال الأعصاب. الجراء هي تشريح عمره يوما بعد الولادة (ع) 5-14، الغدد النخامية متصلة مع الأعصاب تريجيمينال ككل. للفئران القديمة أكثر من 3 أسابيع، يتم تشريح الغدد النخامية بعناية مجانية من الأنسجة المحيطة بها. ونحن أيضا عرض كيفية تضمين الغدد النخامية في اتجاه سليم باستخدام الأنسجة المحيطة بها كمعالم للحصول على إشباع المقاطع الاكليلية. هذه الأساليب مفيدة في تحليل الملامح النسيجي واﻹنمائية الغدد النخامية في وضع الفئران.

Introduction

الغدة النخامية أو النخامية جهاز الغدد الصماء هام إفراز الهرمونات الضرورية للتوازن1،2. تشريحيا، الغدة النخامية بنية ” اثنين في واحد ” تتكون من نيوروهيبوفيسيس وأدينوهيبوفيسيس. هذه الأجزاء لها أصول جنينية مختلفة والدالة بطريقة مختلفة جداً. مشتق من الأديم الظاهر العصبي neurohypophysis وتفرز الاكسيتوسين والهرمون المضاد. Adenohypophysis تنبع من الحقيبة راثكي وهي المسؤولة عن الإفراج عن الهرمونات بما فيها هرمون النمو، البرولاكتين، – الغدة الدرقية الهرمون، جريب – الهرمون، والهرمون، وهرمون ﻫﺭﻣﻭﻧ، و الصباغية – الهرمون3،،من45.

الغدة النخامية تقع على سطح عظم وتدي (السرج) الجمجمة الماوس الظهرية وإرفاق الكلمة الدماغ بساق هشة. ويحاط جانبياً بالاعصاب تريجيمينال والأسفل6،chiasm البصرية7. الغدة بشكل بيضاوي ممدود مع محورها طويل عمودي إلى رئيس. على سطحه الظهرية، في نيوروهيبوفيسيس وفي أدينوهيبوفيسيس يمكن بسهولة أن ترسيمها، مع السابقة تحتل منطقة وسطى الظهرية وتوسيع هذه الأخيرة أفقياً وبطنيا. خلال التنمية اللاحقة للولادة، وزيادة حجم الغدة النخامية سريعاً في الشهر الأول بعد الولادة8،9. ومع ذلك، لا تزال الغدة النخامية الماوس صغيرة جداً في الحجم مع متوسط وزن 1.9 ملغ وقطر منذ فترة طويلة-محور ~ 3 مم في البالغين10، قطر منذ فترة طويلة-المحور 2-2.5 ملم في يوم الولادة 21 (P21)، و 1-1، 5 ملم فقط في P0.

مقطع الاكليلية هو المفضل لعرض كل من أدينوهيبوفيسيس ونيوروهيبوفيسيس في شريحة واحدة من الغدة النخامية الماوس. بيد بعض المهارات التقنية المطلوبة للحصول على إرضاء المقاطع الاكليلية الغدد النخامية من الفئران نظراً للحجم الصغير استثنائية والتشريح متميزة البلدان النامية. في هذه المقالة الفيديو، نظهر كيفية تشريح الغدد النخامية الماوس وإعداد أقسام الاكليلية الغدة النخامية في مراحل مختلفة من التنمية.

Protocol

هي ولدت الفئران C57BL/6 في ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض. جميع الأساليب التجريبية الحيوانية امتثالا للمبادئ التوجيهية التي أقرتها لجنة الأخلاقيات في الجامعة الطبية العسكرية الثانية ورعاية الحيوان. 1-“تسلخ من بعد الولادة تطوير الغدة النخامية” إجراء التخدير: مكان ال?…

Representative Results

ويقدم هذا البروتوكول وسيلة تشريح الغدد النخامية من الفئران البلدان النامية. للماوس الولدان، ومنطقتي سيلا كاملة تحتوي على الغدة النخامية والأعصاب تريجيمينال، وتحت تم تشريح عظم وتدي خارجاً من قاعدة الجمجمة. الغدة النخامية صغيرة وحساسة لا تزال سليمة أثناء العملية (<strong clas…

Discussion

لوضع بيتويتاريس مورين، كان من الصعب من الناحية الفنية للحصول على أقسام الاكليلية السليمة نظراً لخصائصها صغيرة وهشة والخصائص التشريحية الفريدة6،8. ومن ثم اختيار بعض المجموعات البحثية أبواب منتصف السهمي لتحليل مورفولوجية الجنينية والوليدية الغدة النخامية<…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل المنح “الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية” (31201086 و 31470759 و 31671219) و “شنغهاي مؤسسة العلوم الطبيعية” (12ZR1436900).

Materials

Tools/Equipment
Surgical scissors-straight JinZhong J21010 can be purchased from other vendors
Fine scissors-strainght JinZhong WA1010 can be purchased from other vendors
Blunt forceps JinZhong JD1020 can be purchased from other vendors
Fine forceps Dumont RS-5015 for isolation of the pituitary
26G (0.45mm) needle HongDa for transcardial perfusion
Syringe (1 mL) BD 300841 can be purchased from other vendors
Syringe (10 mL) BD can be purchased from other vendors
35mm dish Corning 430165 can be purchased from other vendors
Lens cleaning paper ShuangQuan can be purchased from other vendors
Anatomical microscope OLYMPUS SZX-ILLB2-200 can be purchased from other vendors
Embedding cassette Thermo Fisher 22-272423 can be purchased from other vendors
Tissue embedding console system KEDEE KD-BM11 can be purchased from other vendors
Microtome Thermo Fisher HM315R can be purchased from other vendors
Superfrost-Plus slides Thermo Fisher 22-037-246 can be purchased from other vendors
Cover glass Thermo Fisher 12-543 can be purchased from other vendors
Fluorescence microscope OLYMPUS BH2-RFCA can be purchased from other vendors
Name Company Catalog Number Comments
Reagents
Urethane BBI EB0448
NaCl Sigma S9625 for PBS
KCl Sigma P9541 for PBS
Na2HPO4.12H2O Sigma 71650 for PBS
K2HPO4 Sigma P2222 for PBS
NaNO2 Sigma 237213
Heparin Sodium Injection SPH H31022051 for perfusion saline
Paraformaldehyde (PFA) Sigma P6148
Ethanol SCR 10009218
Xylene SCR 10023418
Paraffin Thermo Fisher 8330
Hematoxylin Sigma H9627 for H&E staining
Eosin Y Sigma E4009 for H&E staining
rabbit anti growth hormone (GH) National Hormone for immunostaining
antibody Pituitary Program
Rabbit anti-mouse GFAP antibody Sigma G9269 for immunostaining
Goat anti-rabbit IgG, HRP Jackson 111-035-003 for immunostaining
TSA system NEN Life Science Products NEL700 for immunostaining
Streptavidin, Alexa Fluor 594 Thermo Fisher S32356 for immunostaining
Anti-FITC Alexa Fluor 488 Thermo Fisher A11090 for immunostaining

References

  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
  4. Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
  5. Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
  6. Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
  7. Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
  8. Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
  9. Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
  10. Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
  11. Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
  12. Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
  13. Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
  14. Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).

Play Video

Cite This Article
Cao, D., Ma, X., Zhang, W. J., Xie, Z. Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland. J. Vis. Exp. (129), e56356, doi:10.3791/56356 (2017).

View Video