Summary

Dissezione e preparazione coronale fetta di sviluppare la ghiandola pituitaria del Mouse

Published: November 16, 2017
doi:

Summary

Vi presentiamo un protocollo per sezionare le ghiandole pituitarie e preparare sezioni coronali pituitarie da topi di sviluppo.

Abstract

La ghiandola pituitaria o ipofisi sono un importante organo endocrino che secerne ormoni essenziali per l’omeostasi. Si compone di due ghiandole con origini embrionali separate e funzioni — neurohypophysis e adenohypophysis. Ghiandola pituitaria del mouse in via di sviluppo è molto piccolo e delicato con una forma ovale allungata. Una sezione coronale è preferita per visualizzare sia il adenohypophysis e neurohypophysis in una sola fetta del pituitary del mouse.

L’obiettivo del presente protocollo è quello di ottenere sezioni coronali pituitari corretto con le architetture di tessuto ben conservato da topi di sviluppo. In questo protocollo, descriviamo dettagliatamente come sezionare ed elaborare ghiandole pituitarie correttamente da topi di sviluppo. In primo luogo, topi vengono fissati mediante perfusione perfusione di formaldeide prima della dissezione. Quindi tre diverse tecniche di dissezione vengono applicate per ottenere ghiandole pituitarie intatti a seconda dell’età dei topi. Per topi fetali dai giorni embrionale (E) 17,5-18,5 e neonati fino a 4 giorni, le regioni di sella intera compreso l’osso sfenoidale, ghiandola e nervi di trigeminal vengono sezionate. Per i cuccioli invecchiati giorni postnatali (P) 5-14, ghiandole ipofisi collegati con nervi di trigeminal vengono sezionati nel suo complesso. Per i topi vecchio oltre 3 settimane, le ghiandole pituitaria attentamente vengono sezionate gratis dai tessuti circostanti. Visualizziamo anche come incorporare le ghiandole pituitaria in un orientamento corretto utilizzando i tessuti circostanti come punti di riferimento per ottenere soddisfazione sezioni coronali. Questi metodi sono utili per analizzare le caratteristiche istologiche e dello sviluppo delle ghiandole pituitaria in topi di sviluppo.

Introduction

La ghiandola pituitaria o ipofisi sono un importante organo endocrino che secerne ormoni essenziali per l’omeostasi1,2. Anatomicamente, la ghiandola pituitaria è una struttura di ‘ due-in-one ‘ costituita neurohypophysis e adenohypophysis. Queste parti hanno diverse origini embrionali e funzione in modo molto diverso. Neurohypophysis è derivato da ectoderma neurale e secerne l’ormone antidiuretico e l’ossitocina. Adenohypophysis proviene da di Rathke ed è responsabile per il rilascio degli ormoni tra cui l’ormone della crescita, prolattina, ormone stimolante la tiroide, ormone follicolo – stimolante, ormone luteinizzante, ormone adrenocorticotropo, e ormone distimolazione3,4,5.

La ghiandola pituitaria si riposa sulla superficie dorsale dell’osso sfenoidale (sella turcica) del cranio del mouse e viene fissata al pavimento del cervello da un gambo fragile. Lateralmente è circondato dai nervi di trigeminal e anteriormente dal chiasma ottico6,7. La ghiandola ha una forma ovale allungata con il suo asse perpendicolare a quella della testa. Sulla sua superficie dorsale, neurohypophysis e adenohypophysis può facilmente essere delimitate, con l’ex che occupa la regione dorsale mediale e il quest’ultimo che si estende lateralmente e ventralmente. Durante lo sviluppo postnatale, la dimensione della ghiandola pituitaria aumenta rapidamente nel primo mese dopo la nascita8,9. Tuttavia, la ghiandola pituitaria del mouse è ancora molto di piccole dimensioni con un diametro assi lunghi di ~ 3 mm e un peso medio di 1,9 mg in adulti10, diametro assi lunghi 2-2,5 mm al giorno postnatale 21 (P21) e solo l’1-1,5 mm in P0.

Una sezione coronale è preferita per visualizzare sia adenohypophysis e neurohypophysis in una sola fetta del pituitary del mouse. Tuttavia, alcune abilità tecniche sono necessario per ottenere soddisfazione sezioni coronali di ghiandole pituitarie da topi grazie alle sue dimensioni estremamente ridotte e distinta anatomia di sviluppo. In questo articolo dei video, dimostriamo come sezionare ghiandole pituitarie del mouse e preparare sezioni coronali pituitari alle diverse fasi di sviluppo.

Protocol

topi C57BL/6 sono allevati in condizioni da organismi patogeni specifiche. Tutti i metodi sperimentali animali sono in conformità con le linee guida approvate dal comitato di etica presso Second Military Medical University e cura degli animali. 1. dissezione di postnatale sviluppando ghiandola pituitaria eseguire anestesia: posto topi neonatali (P0 – P5) su ghiaccio tritato per indurre ipotermia. Per topi più di 5 giorni di età, iniettare intraperitonealmente 5% uretano (30 µ l…

Representative Results

Questo protocollo presenta un metodo per sezionare ghiandole pituitarie da topi di sviluppo. Per il mouse neonatale, le regioni di sella intera che contiene la ghiandola pituitaria, i nervi di trigeminal e la sottostante osso sfenoidale sono stati sezionati fuori dalla base del cranio. La ghiandola pituitaria piccola e delicata rimasto intatta durante il processo (Figura 1A). Per topi più di 5 giorni, le ghiandole pituitaria collegate ai nervi di trigeminal …

Discussion

Per lo sviluppo di cadaveri murini, è stato tecnicamente difficile ottenere sezioni coronali corretto a causa della loro piccole e fragile caratteristiche e peculiarità anatomiche6,8. Alcuni gruppi di ricerca ha così scelto sagittale sezioni per analizzare la morfologia di embrionale e neonatale pituitario11,12. Però la sezione sagittale del pituitary è anche capace di risultati intermedi, anteriore …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni da National Natural Science Foundation of China (31201086, 31470759 e 31671219) e Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900).

Materials

Tools/Equipment
Surgical scissors-straight JinZhong J21010 can be purchased from other vendors
Fine scissors-strainght JinZhong WA1010 can be purchased from other vendors
Blunt forceps JinZhong JD1020 can be purchased from other vendors
Fine forceps Dumont RS-5015 for isolation of the pituitary
26G (0.45mm) needle HongDa for transcardial perfusion
Syringe (1 mL) BD 300841 can be purchased from other vendors
Syringe (10 mL) BD can be purchased from other vendors
35mm dish Corning 430165 can be purchased from other vendors
Lens cleaning paper ShuangQuan can be purchased from other vendors
Anatomical microscope OLYMPUS SZX-ILLB2-200 can be purchased from other vendors
Embedding cassette Thermo Fisher 22-272423 can be purchased from other vendors
Tissue embedding console system KEDEE KD-BM11 can be purchased from other vendors
Microtome Thermo Fisher HM315R can be purchased from other vendors
Superfrost-Plus slides Thermo Fisher 22-037-246 can be purchased from other vendors
Cover glass Thermo Fisher 12-543 can be purchased from other vendors
Fluorescence microscope OLYMPUS BH2-RFCA can be purchased from other vendors
Name Company Catalog Number Comments
Reagents
Urethane BBI EB0448
NaCl Sigma S9625 for PBS
KCl Sigma P9541 for PBS
Na2HPO4.12H2O Sigma 71650 for PBS
K2HPO4 Sigma P2222 for PBS
NaNO2 Sigma 237213
Heparin Sodium Injection SPH H31022051 for perfusion saline
Paraformaldehyde (PFA) Sigma P6148
Ethanol SCR 10009218
Xylene SCR 10023418
Paraffin Thermo Fisher 8330
Hematoxylin Sigma H9627 for H&E staining
Eosin Y Sigma E4009 for H&E staining
rabbit anti growth hormone (GH) National Hormone for immunostaining
antibody Pituitary Program
Rabbit anti-mouse GFAP antibody Sigma G9269 for immunostaining
Goat anti-rabbit IgG, HRP Jackson 111-035-003 for immunostaining
TSA system NEN Life Science Products NEL700 for immunostaining
Streptavidin, Alexa Fluor 594 Thermo Fisher S32356 for immunostaining
Anti-FITC Alexa Fluor 488 Thermo Fisher A11090 for immunostaining

References

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Cite This Article
Cao, D., Ma, X., Zhang, W. J., Xie, Z. Dissection and Coronal Slice Preparation of Developing Mouse Pituitary Gland. J. Vis. Exp. (129), e56356, doi:10.3791/56356 (2017).

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