Summary

Polycystic 난소 증후군 연구 Hyperandrogenic 마우스 모델

Published: October 02, 2018
doi:

Summary

우리는 PCOS와 이러한 PCOS 같은 댐에서 자손의 이상 공부 dihydrotestosterone 펠 릿 마른 PCOS 같은 마우스 모델의 개발을 설명 합니다.

Abstract

Hyperandrogenemia 여성에서 생식 및 대사 기능에 중요 한 역할을 담당 하 고 다낭 성 난소 증후군의 특징 이다. PCOS 가진 여자를 모방 하는 마른 PCOS 같은 마우스 모델을 개발 하는 것은 임상적으로 의미가 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 이러한 모델을 설명합니다. DHT (dihydrotestosterone) 크리스탈 분말 펠 릿의 4mm 길이 삽입 하 여 (펠 릿의 총 길이 8 m m), 매월 교체, 하지 DHT (no-DHT)으로 이식 하는 쥐 보다 더 높은 혈 청 DHT 레벨 2 배와 PCOS 같은 마우스 모델을 생성할 수 있습니다. 우리는 체중과 신체 구성을 변경 하지 않고 생식 및 대사 장애를 관찰. 불모의 높은 학위를 전시, 이러한 PCOS 같은 여성 쥐의 작은 하위 집합 임신 얻을 수 그들의 자손 성인 지연된 사춘기 및 증가 남성 호르몬을 표시 하는 동안에. 이 PCOS 같은 마른 마우스 모델 PCOS와 이러한 PCOS 같은 댐에서 자손의 이상 공부를 유용한 도구입니다.

Introduction

Hyperandrogenism 안 드로 겐 과잉 및 PCOS (애 PCOS) 사회와 NIH 기준에 따라 polycystic 난소 증후군 (PCOS)의 특징 이다. PCOS 가진 여자 임신 어려움이 있고 임신 합병증1의 위험을 증가 했다. 그들은 임신 하는 경우에 그들의 여성 자손 불리 한 건강 결과2,3있다. 다양 한 전략4,5,6,7,,89,10,11 을 사용 하 여 동물 모델 개발 되었습니다. , 12 그리고 체중 증가와 비만 확장된 adipocyte 크기 및 증가 체형 무게와 관련 된 (무 배 란, 나 장애인된 포도 당 및 인슐린 내성) PCOS의 많은 기능을 전시. PCOS를 공부 하는 데 사용 되는 동물 모델을 생산 하는 두 가지 주요 전략을 확인 하 고 있습니다. 하나는 출생13후 높은 수준의 androgens 직접 (외 인 안 드로 겐 주입/삽입) 또는 직접 (예: 안 드로 겐 변환할 aromatase 억제제와 에스트로겐 차단) 치료입니다. 다른 연구는 자손을 임신14,15 동안 androgens의 태아 hyperexposure입니다. 예를 들어 붉은 털 원숭이16,17, 양18, 그리고 자궁내 기간 안 드로 겐의 남성 수준에 노출 하는 설치류에서 여성 자손 PCOS 같은 특성 나중에 인생에서에서 개발. 이 모델은 크게 높은 안 드로 겐 효과, 그리고 태아 프로그래밍, 그리고 자 궁 환경에 미치는 영향에 대 한 우리의 이해를 향상. 그러나,이 모델은 그들의 자신의 제한: 1) 동물 개발 비만 이며 따라서 어려운 비만 유발 생식과 대사 부전;에서 hyperandrogenemia의 효과 분리 하 2) 하기 전에 임신 PCOS 가진 여자는 이미 안 드로 겐의 상부를 전시, 따라서 oocytes 수정; 전에 초과 androgen에 노출 되었을 3) 스토 (T) 또는 dihydrotestosterone (DHT) 출생 후 또는 임신 중 사용의 약리학 복용량 PCOS의 안 드로 겐 환경을 반영 되지 않을 수 있습니다. 난소 follicular 액체 또는 혈 청에서 측정 되었습니다 테 스토 테 론과 DHT 수치가 되며 남성 호르몬 DHT 수준과 PCOS5,,1920,21 여성에서 더 높은 1.5 3.9 배 ,,2223 영향을 받지 않는 여성에 비해. 우리는 성인 마우스 모델23,24,25 의 4 m m 길이와 펠 릿의 삽입에서 만성 DHT 노출의 개시의 2 주 이내 생식 및 대사 기능 장애를 개발 하 고 만든 크리스탈 DHT 분말 (펠 릿의 총 길이 8 m m). 이 모델 DHT 치료 없이 통제 쥐 보다 2-fold 높은 (2xDHT 라고도 함)에 대 한 혈 청 DHT 수준을 생성 합니다. 2xDHT 마우스 기저 혈 청 estradiol, 남성 호르몬, LH의 변경을 전시 하지 않습니다 하지 비만, 개발 하 고 유사한 난소 무게, 콜레스테롤, 자유로운 지방산, leptin의 혈 청 수준 표시 TNFα과 일리노이-623,24, 25 상대적으로 제어도 최대 3.5 개월 DHT 삽입23,,2425후. 또한, 이미 PCOS의 기능 개발 여성 짝짓기, 우리 자손15의 대사 및 생식 건강에 hyperandrogenic 모성 환경의 영향을 공부할 수 있습니다.

이 새로운 패러다임 (NIH와 AE PCOS 사회 기준에 관련 된)는 상대적으로 비슷한 수준의 androgens 그 여자와 PCOS 2-3 더 높은 남성 호르몬에 영향을 받지 않는 여성에 비해 DHT 수치를 생산 하 여 질병을 모델링 합니다. 그러나,이 모델은 유지 지속적인 exogenous DHT에 의해 프로그래밍 된 생 hyperandrogenism에서 DHT 철회 되 면. 이 글의 전반적인 목표 1에 초점을 하는) 어떻게 DHT 펠 릿; 2) 마우스 모델; 처럼 엎드려 서 PCOS를 생성 하는 방법 3)이이 댐에서 여성 자손을 평가 하는 전략. 다른 측정 및 고기의 평가이 원고에서 해결 되지 않습니다 하지만5,15,23,,2425,26에서 찾을 수 있습니다.

Protocol

여기, 상세한 프로토콜 DHT 펠 릿 준비 및 삽입, 및 생식 하 고 신진 대사 테스트를 위해 선물이. 쥐가이 연구에 사용 된 혼합된 배경 (C57/B6, c d 1, 129Sv) 그리고 음식과 함께 유지 되었다 광고 libitum 24 ° c의 존스 홉킨스 대학에서 브로드 웨이 연구 건물 동물 시설에서 14/10 h 명암 주기 물 의학입니다. 모든 절차는 존스 홉킨스 대학 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다. <p class="jove_tit…

Representative Results

혈 청 DHT 수준 및 포도 당 내성 검사 DHT 수준은 측정 했다 수집 된 혈 청에서 두 ELISA와 LC-MS 프로토콜 1.24-1.25, 그리고 2.9, 3.0. 그러나 DHT 절대 값은 질량 분석 및 ELISA,, DHT 대 아니 DHT 삽입 두 분석에서 유사 이며 전체 실험15,,2324 ( 의 상대 배 (약 2…

Discussion

Hyperandrogenism은 PCOS의 핵심 기능입니다. 혈 청 DHT (두 배 높은 아니 DHT 마우스에 비해 DHT 쥐)이이 프로토콜에 사용 되는 이전 연구에서 다른 조사자에 의해 보고 그 보다 낮은 및 비례 PCOS5,19, 여성 모방을 보정 20,21. 다른 모델과 달리이 2-fold DHT 모델 몸 무게와 DHT 삽입23,<sup clas…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 건강의 국가 학회 (보조금 R00-남서에 HD068130)와 볼티모어 당뇨병 연구 센터에 의해 지원 되었다: 조종사와 (남서)에 타당성 부여.

Materials

Crystalline 5α-DHT powder   Sigma-Aldrich A8380-1G
Dow Corning Silastic tubing Fisher Scientific 11-189-15D 0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter
Medical adhesive silicone  Factor II, InC.  A-100
Goggles, lab coats, gloves and masks.
 10 µL pipette tips without filter USA Scientific 11113700
Microscope slide for smear Fisher Scientific 12-550-003
Diff Quik for staining cells Fisher Scientific NC9979740
  Lancet Fisher Scientific NC9416572
3 mL Syring  Becton, Dickinson and Company (BD), 30985
 attached needle: 20G BD 305176
 Ruler: any length than 10cm with milimeter scale. 
Xylazine  Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise NDC13985-704-10 100mg/ml
Ketamine Hydrochloride Hospira, Inc NDC 0409-2051-05 100mg/ml
 Surgical staple  AutoClip® System, Fine Science Tool 12020-00
 Insulin syringe BD 329461 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe
 Trochar  Innovative Research of America MP-182
Microscope Carl Zeiss Primo Star 415500-0010-001 Germany
Ear punch Fisher Scientific 13-812-201
Testosterone rat/mouse ELISA kit IBL B79174
DHT ELISA kit Alpha Diagnostic International 1940
One touch ultra glucometer Life Scan, Inc.
One touch ultra test stripes Life Scan, Inc.
Eppendorf tube Fisher Scientific 05-402-18
Razor blade Fisher Scientific 12-640
Clidox Fisher Scientific NC0089321
surgical underpad Fisher Scientific 50587953 Supplier Diversity Partner
Manufacturer:  Andwin Scientific 56616018
Betadine Antiseptic Solution Walgreens
3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) 3M Science. Applied to Life
Animal tattoo ink paste Ketchum manufacturing Inc. Brockville, Ontario, Canada
Scale Ohaus Corporation  HH120D Pine Brook, NJ
Electronic digital caliper NEIKO Tools USA 01407A available from Amazon

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Xue, P., Wang, Z., Fu, X., Wang, J., Punchhi, G., Wolfe, A., Wu, S. A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome. J. Vis. Exp. (140), e58379, doi:10.3791/58379 (2018).

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