체외에서 분리된 뉴런을 조작에 대한 레이저 족집게를 사용하여
Summary
이 동영상은 체외에서 레이저 핀셋을 사용하여 교양 뉴런의 조작을 설명합니다.
Abstract
본 논문 및 비디오에서 우리는 체외에서 성인 망막 뉴런의 재생 세포 프로세스의 타겟팅 설정을 연구하기 위해 실험실에서 사용되는 프로토콜을 설명합니다. 망막 세포 문화를 준비 절차, 특히 레이저 핀셋 사용하기 위해 만든 요리에 고립 망막 세포의 도금과 절개, 소화 및 망막의 분쇄 및 최종 함께 시작합니다. 이들 요리는 세포 접착제의 절반과 세포 repellant 절반으로 나누어집니다. 세포 접착제 사이드는 우리의 세포가 성장하는시 기판을 제공 살 – 1 항체의 레이어로 코팅됩니다. 기타 접착제 기판은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다. 셀 repellant 사이드는 폴리 – HEMA의 얇은 레이어로 코팅됩니다. 접시의 폴리 – HEMA 측면에 도금 세포가 레이저 핀셋과 함께 함정에 수송 그리고 쌍을 만들기 위해 살 – 1 면에 세포에 인접 배치됩니다. 어떤 크기의 셀 그룹의 형성이 기술이 가능해야합니다. "레이저 핀셋 제어 미세 조작은"조사가 세포가 이동을 선택할 수있다는 것을 의미하고, 세포 사이의 원하는 거리는 표준화 수 있습니다. 레이저 빔은 문화 요리의 투명한 표면을 통해 이뤄지 때문에, 세포의 선택과 게재는 동봉된, 무균 환경에서 수행하고 있습니다. 세포 영상 시간 경과에 의해 모니터링하고 필요한 세포 생물 학적 기법과 함께 사용할 수 있습니다. 이 기술은 세포 – 세포 상호 작용의 조사를하는 데 도움이 될 수 있습니다.
Protocol
Discussion
라이트 추진력을 가지고 있으며, 그것이 세포를 통해 전달과 같은 광선이 굴절 때 힘이 추진력의 방향을 변경해야합니다. 때문에 운동량 보존의 법칙의 반대 방향으로 포스가 차례로, 휴대폰으로 다시 반응해야합니다. Ashkin (1991)은 현미경의 목적 렌즈의 초점 레이저 빔을에 의해 생성되는 힘은 초점의 중심 방향으로 셀 이동합니다 것으로 나타났다. 레이저 광선의 힘을 몇 piconewtons를 생성하더라도,이 힘을는 매…
Acknowledgements
연구는 NIH 보조금 EY012031과 EY0182175 및 FM 커비 재단에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25mm circle No.1 coverglass | VWR Scientific Inc., Westchester, PA | 48380 080 | ||
| poly-2-hydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA) | Sigma Chemical Co., St Louis, MO | P-3932 | Dissolve in 95% ethanol | |
| Goat anti-mouse IgG antibody | Chemicon International, Temecula CA | AP181 | 1mg in 1ml, dilute 10x for use | |
| Sal-1 supernatant containing mouse anti-salamander antibody | generously provided by Dr. Peter MacLeish | Dr. Peter MacLeish, Morehouse School of Medicine, Atlanta, GA | ||
| 3 mm bore 5ml pyrex disposable pipets | Corning Inc., Corning NY | 7078A-5 | ||
| Cell culture dishes 35mm x 10mm | Corning inc., Corning NY | 430165 | ||
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Dow Corning Corp., Midland MI | |||
| Optical tweezers-microtool or laser tweezers | Cell Robotics Inc., Albuquerque NM | |||
| 1 W continuous wave diode laser of 980nm wavelength | Cell Robotics Inc., Albuquerque NM | |||
| Axiovert 100 inverted light microscope | Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY | |||
| 40x oil immersion plan neofluor objective lens | Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY | Numerical aperture (N.A. 1.3) | ||
| Black and white CCD camera | Sony Corporation, Tokyo, Japan | |||
| Computer and joystick with software | Cell Robotics Inc. | for controlling a motorized stage |
References
- Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles. Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).
- Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers. Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).
- Folkman, J., Moscona, A. Role of cell shape in growth control. Nature. 273, 345-349 (1978).
- Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers. Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).
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- Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers. Mol. Vis.. 4, (1998).
