Encyclopedia of Experiments: Biology
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- एक ज़ेनोबेड़ा एक प्रजाति से लिया गया अंग या ऊतक है और दूसरे में प्रत्यारोपित किया जाता है। एक रोगी-व्युत्पन्न ज़ेनोबेड़ा, या पीडीएक्स, एक कैंसर मॉडल है जिसमें एक रोगी के ट्यूमर से ऊतक को इम्यूनोडिफिश जानवर में प्रत्यारोपित किया जाता है, जैसे कि एक जेब्राफिश लार्वा जिसका प्रतिरक्षा प्रणाली पूरी तरह से विकसित नहीं है, ट्यूमर प्रगति या दवा प्रभावकारिता का अध्ययन करने के लिए। सबसे पहले, लार्वा ट्राइकेन समाधान में 48 घंटे के बाद निषेचन की संज्ञाहरण, और ई3 माध्यम के साथ बनाई गई एक इंजेक्शन प्लेट में लार्वा स्थानांतरित करें।
इसके बाद, रोगी भ्रष्टाचार कोशिकाओं के निलंबन को लोड करें और माइक्रोकैपिलरी सुई में स्थानांतरित करें। एक माइक्रोस्कोप के तहत कोशिकाओं को माइक्रोकैपिलरी सुई का उपयोग करके लार्वा की जर्दी थैली में इंजेक्ट किया जाता है। अब, ग्लूकोज और एल ग्लूटामाइन युक्त ई3 समाधान में इंजेक्ट किए गए लार्वा को संस्कृति दें, जो ज़ेनोग्रॉफ्ट कोशिकाओं की उच्च ऊर्जा मांगों का समर्थन करता है।
दवा उपचार के लिए ज़ेनोबेड़ा लार्वा को एक अच्छी तरह से प्लेट में स्थानांतरित करें, कुओं को परीक्षण किए जाने वाले यौगिकों की संख्या और खुराक के आधार पर समूहों में विभाजित करें, और यौगिकों को जोड़ें। एक नियंत्रण समूह शामिल करें। उपचार परिणामों को देखने से पहले 32 डिग्री सेल्सियस पर इलाज लार्वा को इनक्यूबेट करें।
निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम अग्नाशय के कैंसर के एक zPDX मॉडल में दवाओं gemcitabine और navitoclax का अध्ययन करेंगे।
- जेब्राफिश लार्वा को एनेस्थेटाइज करने के बाद, उन्हें इंजेक्शन प्लेट में स्थानांतरित करें, जो संशोधित E3 से भरा हुआ है। मिश्रित कोशिका निलंबन के 25 माइक्रोलीटर को माइक्रोकैपिलरी सुई में लें, और सुई को माइक्रोइंजेक्शन जोड़तोड़ में डालें। इंजेक्शन दबाव और समय निर्धारित करें, और 48 घंटे के बाद निषेचन जेब्राफिश की जर्दी में 50 से 80 कोशिकाओं को इंजेक्ट करें।
पोस्ट ज़ेनोग्बेड़ा जेब्राफिश लार्वा को 32 डिग्री सेल्सियस पर मिक्स सॉल्यूशन के 40 मिलीलीटर में स्थानांतरित करें। 10 क्सीनोबेड़ा लार्वा को 12-वेल प्लेट के प्रत्येक कुएं में रखें। इसके बाद, लार्वा को चार समूहों में विभाजित करें।
नियंत्रण समूह को 0.1% डीएमएसओ वाले ई3 के साथ व्यवहार करें, और अन्य समूहों को जेमसिटाबिन और/या नेविटक्लाज के साथ व्यवहार करें। दो दिनों के लिए सभी लार्वा को 32 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। xenografted लार्वा पोस्ट उपचार को एनेस्थेटाइज करने के बाद, उन्हें 3% मिथाइलसेलुलोस में रखें।
पार्श्व दृश्य से लार्वा को छवि देने के लिए फ्लोरेसेंस या कॉन्फोसल माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। फिर, लाल और हरे फ्लोरोसेंट संकेतों की तीव्रता को निर्धारित करने के लिए इमेज जे और ग्राफ पैड सॉफ्टवेयर का उपयोग करें।
