Encyclopedia of Experiments: Biology
需要订阅 JoVE 才能查看此 内容. 登录或开始免费试用。
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- En xenograft er et organ eller vev tatt fra en art og transplantert til en annen. En pasient-avledet xenograft, eller PDX, er en kreftmodell der vev fra en pasients svulst er implantert i et immunodeficient dyr, for eksempel en sebrafisk larve hvis immunsystem ikke er fullt utviklet, for å studere tumorprogresjon eller legemiddeleffekt. Først bedøve 48-timers post befruktningslarver i trikainoppløsning, og overfør en larve til en injeksjonsplate som inneholder agarose laget med E3 medium.
Deretter laster du suspensjonen av pasienttransplantasjonscellene og overføres til en mikrokapillær nål. Under et mikroskop injiserer cellene i larvens eggeplommesekk ved hjelp av en mikrokapillær nål. Nå, kultur de injiserte larver i E3-løsning som inneholder glukose og L glutamin, som støtter de høye energibehovene til xenograftcellene.
For legemiddelbehandling overføre de xenografterte larver til en brønnplate, del brønnene i grupper basert på antall og doser av forbindelser som må testes, og legg til forbindelsene. Inkluder en kontrollgruppe. Inkuber de behandlede larver ved 32 grader Celsius før du observerer behandlingsresultater.
I følgende protokoll vil vi studere stoffene gemcitabine og navitoclax i en zPDX-modell av kreft i bukspyttkjertelen.
- Etter bedøvelse av sebrafisk larver, overføre dem inn i injeksjonsplaten, som er fylt med modifisert E3. Ta opp 25 mikroliter av blandet celle suspensjon inn i mikrokapillær nål, og sett nålen inn i mikroinjeksjon manipulator. Sett injeksjonstrykket og tiden, og injiser 50 til 80 celler i eggeplommesekken på 48 timer etter befruktning sebrafisk.
Overfør de post xenograftede sebrafisk larver i 40 milliliter blandeløsning ved 32 grader Celsius. Plasser 10 xenograferte larver i hver brønn av en 12-brønns tallerken. Deretter deler larvene i fire grupper.
Behandle kontrollgruppen med E3 som inneholder 0,1% DMSO, og behandle de andre gruppene med gemcitabine og / eller navitoclax. Inkuber alle larver ved 32 grader Celsius i to dager. Etter bedøvelse av xenografted larver etter behandling, plasser dem i 3% metylcellulose.
Bruk deretter et fluorescens eller konfokalt mikroskop for å avbilde larvene fra sidevisningen. Bruk deretter Image J- og Graph Pad-programvaren til å kvantifisere intensiteten av røde og grønne fluorescerende signaler.
