Summary

のてんかんの変異体における発作のためのアッセイをNeurocircuitショウジョウバエ</em

Published: April 15, 2009
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Summary

使用して、高頻度電気刺激、発作のような活動がで誘導することができる<em>ショウジョウバエ</em>。この活動は、簡単に巨大な光ファイバシステムから記録されます。

Abstract

キイロショウジョウバエの活動のような発作を研究するための便利なツールです。発作が物理的な衝撃や電気的刺激のいずれかを介して誘導することができる変異体の様々な発作活動と行動のさまざまな側面の研究のために使用可能です。十分に高い電圧で刺激した場合、野生型を含むすべてのハエは、発作のような活動を受けることになる。活動のような発作は、全か無かの応答であり、各遺伝子型は、特定の発作閾値を持っています。ハエの特定の遺伝子型の発作閾値はいずれかの薬物による治療によって、または遺伝的抑制または機能の拡張によって変更することができます。しきい値が容易に電気生理学によって測定されます。発作様活性は、胸部の背側縦筋(DLMS)を介して脳に直接配信されると記録された高頻度の電気刺激により誘導することができる。 DLMSは、巨大な光ファイバシステムの一部によって神経支配されています。低電圧、高周波の刺激から始まり、その後少しずつ電圧を上げ、単一のフライ用の発作閾値を測定することができます。

Protocol

試料の調製: 実験前の晩には、目的の遺伝子型の雄のハエを麻酔し、ソフトなナイロンプラグ付きバイアルに配置されます。コットンボールにも働くだろう。麻酔の後、発作閾値が変更され、一晩理想的ですがハエが最高、少なくとも6時間放置されていますので。 実験日に、ハエは片側歯科ワックスの層をガラススライドに1つずつ搭載されている。…

Discussion

このビデオでは、個々のショウジョウバエのハエの発作の閾値を決定する際の基本的な手順を実証してきました。代わりにデジタルオシロスコープを使用する代わり、コンピュータ化されたデジタイザを使用することもできます。このテクニックは、ハエの発作閾値に対する薬剤または遺伝子改変の効果を判断するのに便利です。

Acknowledgements

この作品は、カリフォルニア大学バークレー校動物使用委員会によって定められたガイドラインおよび規制に準拠して行われたショウジョウバエショウジョウバエでMTの実験にNIHの研究助成金、てんかん財団の助成金とMcKnight財団の助成金によってサポートされていました。

Materials

Material Name Typ Company Catalogue Number Comment
Digital oscilloscope   Hitachi VC-6523  
Stimulator   Cornerstone S-900  
Preamplifier   World Precision Instruments Electro 705  
Micromanipulators   Narishige various  

Referenzen

  1. Kuebler, D., Tanouye, M. A. Modifications of seizure susceptibility in Drosophila. J Neurophysiol. 83, 998-1009 (2000).
  2. Kuebler, D., Zhang, H., Ren, X., Tanouye, M. A. Genetic suppression of seizure susceptibility in Drosophila. J Neurophysiol. 86, 1211-1225 (2001).
  3. Song, J., Tanouye, M. A. Seizure suppression by shakB2, a gap junction mutation in Drosophila. J Neurophysiol. 95, 627-635 (2006).
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Diesen Artikel zitieren
Howlett, I. C., Tanouye, M. A. Neurocircuit Assays for Seizures in Epilepsy Mutants of Drosophila. J. Vis. Exp. (26), e1121, doi:10.3791/1121 (2009).

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