在斑马鱼和镜头移植在眼突变分析中的应用
Summary
镜头的发展涉及到与其他组织的互动。几个的斑马鱼眼突变体的特点是异常的小镜头尺寸。在这里，我们展示了一个镜头移植实验，以确定这是否表型是由于内在的原因，或环绕镜头的组织，有缺陷的相互作用。
Abstract
镜头视杯[1,2]的发展起着重要的作用。使用斑马鱼作为模式生物，关于镜头发展的问题可以得到解决。斑马鱼是由于一些优势特点，包括体积小，繁殖力高，生命周期短，便于照顾的遗传研究非常有用。镜头发展迅速出现在斑马鱼。 72 HPF，斑马鱼的镜头功能成熟[3 ]。丰富的遗传和分子资源来支持在斑马鱼的研究。此外，斑马鱼眼的其他脊椎动物相似，提供其作为人类缺陷极好的动物模型 [4-7]使用的基础。一些斑马鱼突变体表现出镜头的异常，包括高水平的细胞死亡，在某些情况下会导致晶状体组织的一个完整的变性[8 ]。
为了确定是否镜头异常是由于内在的原因或与周围组织有缺陷的相互作用，一个突变成野生型眼晶状体移植。仔细解剖用火抛光的金属针，突变型或野生型镜头是从供体动物，并转移到主机。为了区分野生型和突变型的组织，转基因线是用来作为供体。该行表示在所有组织的膜结合型绿色荧光蛋白，包括镜头。这种移植技术在斑马鱼的镜头突变体的研究是必不可少的工具。
Protocol
第1部分：准备胚胎在这个协议中，我们将使用JJ XY符号来表示一个假设的斑马鱼镜头突变。 斑马鱼品系均保持在28.5在14H light/10h暗周期彗星的标准鱼设施条件。 在晚上，斑马鱼应变JJ XY地方的男性和女性：AB / TU; TG（mGFP）在坦克与一个分频器，它们彼此分开。这种交叉的后代将表达绿色荧光蛋白基因，在所有组织和捐助者将?…
Discussion
有几个步骤需要特别注意在镜头移植。
- 锐利的针：这是更好地开展晶状体移植前的准备几针，针的尖端应尽可能薄。一个较厚的针将撕裂更因为它的直径更广泛的组织，造成眼睛未能愈合。
- 安排的胚胎，移植前，您必须胚胎的位置，所以他们就躺在他们身边。当定位，1.2％琼脂糖硬化速度非常快。要缓慢琼脂糖硬化，培养皿可以让它漂浮在40℃水浴预热。
- 插入主机眼?…
Acknowledgements
此过程如下很大程度上条例草案“杰弗里实验室移植技术开发洞穴鱼。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
Referenzen
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Diesen Artikel zitieren
Zhang , Y., McCulloch, K., Malicki, J. Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants. J. Vis. Exp. (28), e1258, doi:10.3791/1258 (2009).