Zebra balığı Lens Nakli ve Göz Mutants Analizi Uygulaması
Summary
Lens geliştirme, diğer dokuları ile etkileşimleri içerir. Çeşitli zebrafish göz mutantlar anormal küçük bir lens boyutuna göre karakterize edilir. İşte biz bu fenotip içsel nedenler veya objektif çevreleyen dokuların arızalı etkileşimler nedeniyle olup olmadığını belirlemek için bir lens nakli deney göstermektedir.
Abstract
Objektifi, optik fincan [1,2] gelişiminde önemli bir rol oynar. Bir model organizma olarak zebrafish kullanılması, objektif gelişimi ile ilgili sorular ele alınabilir. Zebrafish dahil olmak üzere birçok avantajlı özellikleri, küçük boyutu, yüksek fekondite, kısa bir yaşam döngüsü, ve bakım kolaylığı nedeniyle genetik çalışmalar için yararlıdır. Lens geliştirme zebrafish hızla oluşur. 72 hpf, zebrafish objektif fonksiyonel olgun [3]. Bol ve moleküler genetik kaynakları zebrafish araştırmaları desteklemek için kullanılabilir. Buna ek olarak, diğer omurgalıların zebrafish göz benzerlik, insan kusurları mükemmel bir hayvan modeli [4-7] olarak kullanımı için temel sağlar . Birkaç zebrafish mutantlar, bazı durumlarda objektif dokularda tam bir dejenerasyon hücre ölümüne yol açan yüksek seviyede, [8]. Da dahil olmak üzere, lens anormallikler de sergileyebilirler
Lens anormallikleri içsel nedenler ya da çevre dokulara arızalı etkileşimleri nedeniyle olup olmadığını belirlemek için, bir mutant yabani tip bir göz içine lens nakli yapılır. Dikkatli bir şekilde kullanılması yangına cilalanmış metal iğneler, mutant ya da yabani tip lensler donör hayvan disseke ve sahibi aktarılır. Yabani tip ve mutant dokuların ayırt etmek için, bir transgenik çizgi donör olarak kullanılır. Bu satır, lens dahil olmak üzere tüm dokularda membran-bağlı GFP ifade eder. Bu nakli tekniği zebrafish lens mutantlar çalışmalarda önemli bir araçtır.
Protocol
Discussion
Birkaç adım objektif transplantasyon sırasında özel dikkat gerektirir.
- Bilenmiş iğneler: objektif nakli yapılmadan önce birkaç iğne hazırlamak için daha iyi ve iğne ucu mümkün olduğunca ince olmalıdır. Kalın iğne gözü iyileşmek için bir başarısızlık neden daha geniş çapı nedeniyle daha fazla doku gözyaşı.
- Embriyoların Düzenleme: onlar, yan yatarken, böylece sağ nakli önce size embriyoların pozisyon gerekir. Yerleştirirken,% 1.2 agaroz sertleşerek çok hı…
Acknowledgements
Bu prosedür, Bill Jeffrey laboratuar tarafından mağara balıkları için geliştirilmiş nakli tekniği büyük ölçüde izler.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
Referenzen
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
