Rato células epiteliais mamárias forma Mammospheres durante a diferenciação lactogênica

Summary

HC11 lactogênica diferenciação pode ser caracterizada pela formação de estruturas de cúpula referido como mammospheres. As estruturas podem ser enumerados por microscopia de contraste de fase para ajudar a quantificar a diferenciação lactogênese.

Abstract

Uma medida fenotípicas comumente usado para determinar o grau de diferenciação do mouse em lactogênica mamárias culturas de células epiteliais é a formação de estruturas celulares em forma de cúpula referido como mammospheres¹. A linhagem de células HC11 tem sido empregado como um sistema modelo para o estudo da regulação da diferenciação lactogênica mamárias tanto<em> In vitro</em> E<em> In vivo</em². O HC11 células se diferenciam e sintetizar proteínas do leite em resposta ao tratamento com hormônios lactogênese. Acompanhando o crescimento do HC11 rato células epiteliais mamárias de confluência, a diferenciação lactogênica foi induzida pela adição de uma combinação de hormônios lactogênica incluindo a dexametasona, insulina e prolactina, conhecido como DIP. O HC11 células induzidas para diferenciar foram fotografados em momentos até 120 horas após a indução de diferenciação e do número de mammospheres que apareciam em cada cultura foi enumerada. O tamanho da mammospheres indivíduo se correlaciona com o grau de diferenciação e este é representado nas imagens das células de diferenciação.

Protocol

O HC11 células foram cultivadas a confluência de seis dias em meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%, insulina 5μg/ml, 10 mM HEPES, fator de crescimento 10ng/ml epidérmico (EGF) para estabelecer competência. As células foram lavadas com PBS e mantidos em meio de crescimento sem EGF por 24 horas. Para induzir a diferenciação lactogênica as células foram incubadas em meios de diferenciação, isto é, RPMI com dexametasona (10 -6 M), a insulina (5 mg / ml) e prolactina (5 mg / ml)…

Discussion

Para que esta técnica seja bem sucedida e da melhor qualidade, as células epiteliais deve ser mantida a confluência antes de ser induzidos com hormônios lactogênese. Pode haver situações em que há mammospheres numerosas, o que torna a quantificação difícil. Assim, para fins quantitativos, é melhor para fotografar a mammospheres em um ponto de tempo quando o número de mammospheres é capaz de ser contado.

Embora existam diversos marcadores moleculares utilizados para determinar o…

Materials

Material Name	Typ	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394