Eine reversible, nicht-invasive Methode für Airway Resistance-Messungen und bronchoalveolären Lavage Sampling in Mäuse

Summary

Wiederholte Messungen von Nagetier Atemfunktion und Probenahme von Atemwegs Entzündungszellen sind wünschenswert, aber in der Regel nicht möglich. Hier beschreiben wir eine wiederholbare Methode für oral Intubation Mäuse, wiederholte Messungen der Atemwege Hyperreaktivität und die Entnahme von Atemwegs-inflammatorischen Zellen ermöglicht.

Abstract

Airway Hyperreaktivität (AHR) Messungen und Lavage (BAL) Flüssigkeit Probenahme sind unerlässlich, um experimentelle Asthma-Modellen, sondern wiederholte Verfahren auf diese Messungen in der gleichen Tier zu erhalten sind in der Regel nicht möglich. Hier zeigen wir, Protokolle für die Gewinnung von Mäusen wiederholten Messungen von AHR und Bronchalveolarlavages flüssigen Proben. Die Mäuse wurden intranasal sieben Mal mehr als 14 Tage in Frage gestellt mit einem potenten Allergen oder Schein behandelt. Vor der ersten Herausforderung, und innerhalb von 24 Stunden nach jeder intranasalen Challenge wurden die gleichen Tiere narkotisiert, intubiert und mündlich mechanisch belüftet. AHR, durch den Vergleich Dosis-Wirkungs-Kurven der Atemwege Widerstand (RRS) durch Erhöhung intravenösen Dosen von Acetylcholin (Ach)-Chlorid zwischen Schein und Allergen-induzierte herausgefordert Tiere beurteilt, bestimmt. Danach, und über die gleiche Intubation wurde die linke Lunge gespült, so dass Differential Aufzählung der Atemwege Zellen durchgeführt werden konnte. Diese Studien zeigen, dass wiederholte Messungen der AHR und BAL-Flüssigkeit Abholmöglichkeit sind aus dem gleichen Tiere und die maximale Atemwegshyperreaktivität und Atemwege Eosinophilie sind innerhalb von 7-10 Tagen nach Beginn Allergen-Provokation erreicht. Diese neue Technik reduziert die Anzahl der Mäuse für die Längs-Experimente benötigt und ist für diverse Nagetierarten, Krankheitsmodelle und Atemwege Physiologie Instrumente.

Protocol

Allergen Herausforderung: C57BL / 6 Mäuse, 4-8 Wochen alt, werden in einem luftdichten Plexiglas Kammer mit einer 3,2% Isofluran in Sauerstoff Dampf-Gemisch für 10 Minuten auf tiefe allgemeine Betäubung zu erreichen gespült betäubt. Intranasale Allergen Herausforderungen (45μL OVA (22,5 ug) und 7μL A. oryzae (7 ug), in PBS) verabreicht werden, jeden Dienstag, Donnerstag und Sonntag, für eine Gesamtmenge von sieben aufeinander folgenden Anwendungen. Anästhesi…

Discussion

Die Studie von Asthma und verschiedenen anderen Atemwegs-obstruktiven, stellt eine aktive und wachsende Gebiet der biomedizinischen Forschung. Ein wichtiger Bestandteil der Asthma-experimentelle Forschung ist die Fähigkeit, Veränderungen der Atemwege Größe unter verschiedenen Bedingungen zu messen. Übermäßige Verengung der Atemwege in Reaktion auf provokative Herausforderung, eine kanonische Funktion von Asthma und Lungenerkrankungen und eine Eigenschaft der Atemwege bezeichnet Atemwegshyperreaktivität, ist ein …

Materials

Airway physiology measurement software (Rescomp) was custom prepared (Millenium Premier Group; 415-519-4371).
Data was analyzed using a PC workstation running Windows XP equipped with a Pentium III CPU (Intel, Inc. Santa Clara, CA) and a 17-pin analog to digital signal converter (National Instruments, #PC-LPM16).
A small animal airway physiology workstation was custom assembled (Millenium Premier Group) using commercially available pressure transducers (part #TRD5700 and TRD4510), preamp modules (part #MAX2270), chassis (part # MAX1320; all from Buxco, Inc. Wilmington, NC) and a customized small animal plethysmograph.
0.5mm external diameter fiber-optic thread, connected to light source (Cole Palmer Illuminator, 41722 series)
Ventilator (Harvard Apparatus Mouse Ventilator, #687)
10 mm, 27ga needle (BD Biosciences, cat. no. 309602)
Heat lamp
1 ml syringe (BD Biosciences, cat. no. 305109)
4 clamps (Pony 3200 spring clamp)
0.5 mm external wire for intubation guide
Hemacytometer
Superfrost/plus microscope slides (Fisher cat. no. 12-550-15)
Shandon Filter Cards (Thermo cat. no. 5991022)
Differential cell slide stain (Fisher cat. no. 122911)
Light microscope (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
20 ga, 1.25 inch ProtectIV intravenous catheters (Smith Medical)
0.5 mm polymer optical fiber (Edmund Optics # NT02-532).

<!– OLD Materials List 4/12/10 Changed

Airway physiology measurement software (Rescomp) was custom prepared (Millenium Premier Group; 415-519-4371) and data were analyzed using a PC workstation running Windows XP equipped with a Pentium III CPU (Intel, Inc. Santa Clara, CA) and a 17-pin analog to digital signal converter (National Instruments, #PC-LPM16). Small animal airway physiology workstation was custom assembled (Millenium Premier Group) using commercially available pressure transducers (part #TRD5700 and TRD4510), preamp modules (part #MAX2270) and chassis (part # MAX1320; all from Buxco, Inc. Wilmington, NC) and a customized small animal plethysmograph. 0.5mm external diameter fiber-optic thread, connected to light source (Cole Palmer Illuminator, 41722 series); Ventilator (Harvard Apparatus Mouse Ventilator, #687); 10 mm, 27ga needle (BD Biosciences, cat. no. 309602); Heat lamp; 1 ml syringe (BD Biosciences, cat. no. 305109); 4 clamps (Pony 3200 spring clamp); 0.5 mm external wire for intubation guide); Hemacytometer; Superfrost/plus microscope slides (Fisher cat. no. 12-550-15); Shandon Filter Cards (Thermo cat. no. 5991022); Differential cell slide stain (Fisher cat. no. 122911); Light microscope (Leica); Cytospin 3 (Shandon); 20 ga, 1.25 inch ProtectIV intravenous catheters (Smith Medical); 0.5 mm polymer optical fiber (Edmund Optics # NT02-532).

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