فحص التعديلات الجينومية: طريقة لتحديد المسوخ التي تم إنشاؤها بواسطة CRISPR في دروسوفيلا

Abstract

المصدر: دو، L.، وآخرون استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة النسخ الثنائية الخاصة بالأنسجة في Drosophila عن طريق تحرير الجينوم. ج. فيس إكسب. (2018).

يصف هذا الفيديو طريقة فحص لتحديد ذباب الدروزوفيلا المعدل وراثيا، والذي تم تعديل جينومه باستخدام CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 هي أداة قوية لتحرير الجينوم أحدثت ثورة في الطريقة التي يمكن للعلماء التلاعب بها جينوم الكائن الحي. في بروتوكول المثال ، سنرى كيفية تحديد المسوخ التي تم إنشاؤها بواسطة CRISPR ، حيث يحل إدراج تسلسل عملية التحويل محل أول إكسون من الجين(bnl) بدون فروع ، وبالتالي إنشاء خط برنامج تشغيل خاص بالجين bnl ، bnl-LexA.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Du et al.,استراتيجية فعالة لتوليد أنظمة نسخ ثنائية خاصة بالأنسجة في Drosophila بواسطة تحرير الجينوم، J. Vis. Exp. (2018). 1. يطير علم الوراثة والفحص (الشكل 1 والشكل 2) عندما تتطور الأجنة المحقونة إلى بالغين ، عبر كل ذباب G0 واحد إلى الذباب الم…

Representative Results

الشكل 1: نظرة عامة على سير العمل لتحرير الجينوم CRISPR/Cas9 بوساطة لإنشاء نظام نسخ ثنائي. يتم الإشارة إلى المدة الزمنية التقريبية المطلوبة لكل خطوة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم….

Materials

Tris-HCl	Sigma Aldrich	T3253	Molekularbiologie
EDTA	Sigma Aldrich	E1161	Molekularbiologie
NaCl	Sigma Aldrich	S7653	Molekularbiologie
UltraPure DNase/RNase-Free Water	ThermoFisher Scientific	10977-023	Molekularbiologie
Primers	IDT-DNA		PCR
Proteinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	Molekularbiologie
2x PCR PreMix, with dye (red)	Sydlab	MB067-EQ2R	Molekularbiologie
MKRS/TB6B	Kornberg lab		Fly line
CO2 station	Genesee Scientific	59-122WCU	fly pushing
Stereo microscope	Olympus	SZ-61	fly pushing
Microtube homogenizing pestles	Fisher-Scientific	03-421-217	genomic DNA isolation