הקרנה לשינויים גנומיים: שיטה לזיהוי מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR בדרוזופילה

Abstract

מקור: Du, L., ואח ‘. אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות ב Drosophila על ידי עריכת הגנום. ג’יי ויס אקספ. (2018).

סרטון זה מתאר שיטת הקרנה לזיהוי זבובי דרוזופילה מהונדסים, שהגנום שלהם שונה באמצעות CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 הוא כלי רב עוצמה לעריכת גנום שחולל מהפכה באופן שבו מדענים יכולים לתפעל את הגנום של האורגניזם. בפרוטוקול הדוגמה, נראה כיצד לזהות מוטנטים שנוצרו על ידי CRISPR, שבהם הכנסה של רצף טראנסאקטיביזציה מחליפה את האקסון הראשון של הגן ללא ענף (bnl), ובכך יוצרת קו נהג ספציפי לגן bnl, bnl-LexA.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Du et al., אסטרטגיה יעילה ליצירת מערכות שעתוק בינאריות ספציפיות לרקמות בדרוסופילה על ידי עריכת הגנום, J. Vis. Exp. (2018). 1. טיסה וגנטיקה והקרנה (איור 1 ואיור 2) כאשר העוברים המוזרקים מתפתחים למבוגרים, חוצים כל זבוב G0 כדי לאזן זבובים. בחר …

Representative Results

איור 1: מבט כולל על זרימת עבודה לעריכת גנום בתיווך CRISPR/Cas9 כדי ליצור מערכת שעתוק בינארית. משך הזמן המשוער הנדרש עבור כל שלב מצוין. לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה. <p class="jove…

Materials

Tris-HCl	Sigma Aldrich	T3253	Molekularbiologie
EDTA	Sigma Aldrich	E1161	Molekularbiologie
NaCl	Sigma Aldrich	S7653	Molekularbiologie
UltraPure DNase/RNase-Free Water	ThermoFisher Scientific	10977-023	Molekularbiologie
Primers	IDT-DNA		PCR
Proteinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	Molekularbiologie
2x PCR PreMix, with dye (red)	Sydlab	MB067-EQ2R	Molekularbiologie
MKRS/TB6B	Kornberg lab		Fly line
CO2 station	Genesee Scientific	59-122WCU	fly pushing
Stereo microscope	Olympus	SZ-61	fly pushing
Microtube homogenizing pestles	Fisher-Scientific	03-421-217	genomic DNA isolation