ゲノム修飾のスクリーニング:ショウジョウバエにおけるCRISPR生成変異体の同定方法

Abstract

出典: Du, L., 他 . ゲノム編集によるショ ウジョウバエ における組織特異的なバイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略. J. ヴィス・エクス (2018).

このビデオでは、CRISPR-Cas9を使用してゲノムを改変したトランスジェニックショウジョウバエを同定するスクリーニング方法について説明します。CRISPR-Cas9は、科学者が生物のゲノムを操作する方法に革命を起こした強力なゲノム編集ツールです。プロトコル例では、TRANSActivationシーケンスの挿入が分岐のない(bnl)遺伝子の最初のエキソンに取って代わるCRISPR生成変異体を同定する方法を見て、bnl-LexAというbnl遺伝子特異的ドライバラインを作成する。

Protocol

このプロトコルは、ゲノム編集、J.Vis. Exp.(2018)によるショウジョウバエにおける組織特異的バイナリ転写システムを生成するための効率的な戦略であるDu et al.からの抜粋である。 1. 飛ぶ遺伝学とスクリーニング(図1および図2) 注入された胚が成人に発達すると、各単一のG0 ハエを横切ってバランサハに飛ぶ。標的となるアリールを含む?…

Representative Results

図1:CRISPR/Cas9媒介ゲノム編集のワークフローの概要を示し、バイナリ転写システムを生成する。 各ステップに必要なおおよその所要時間が示されます。 この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。 <p class="jove_conten…

Materials

Tris-HCl	Sigma Aldrich	T3253	Molekularbiologie
EDTA	Sigma Aldrich	E1161	Molekularbiologie
NaCl	Sigma Aldrich	S7653	Molekularbiologie
UltraPure DNase/RNase-Free Water	ThermoFisher Scientific	10977-023	Molekularbiologie
Primers	IDT-DNA		PCR
Proteinase K	ThermoFisher Scientific	25530049	Molekularbiologie
2x PCR PreMix, with dye (red)	Sydlab	MB067-EQ2R	Molekularbiologie
MKRS/TB6B	Kornberg lab		Fly line
CO2 station	Genesee Scientific	59-122WCU	fly pushing
Stereo microscope	Olympus	SZ-61	fly pushing
Microtube homogenizing pestles	Fisher-Scientific	03-421-217	genomic DNA isolation